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1、上海市临床科研基本实验技能培训——哺乳动物细胞培养：基础交流Meetingdate:2009/12/18SpeechmakerYouzhiHuang（PhD）E-mail:service@research-bio.com:上海锐赛生物技术有限公司ShanghaiR&SBiotechnologyCo.,Ltd.HightechnologyandserviceEyeingforIntegratedSolutionR&S,yourreliablecooperator!目录细胞培养基本概念细胞培养基本要求细胞培养基本技术锐赛细胞相关技术服务Hightechn
2、ologyandservice,EyeingforIntegratedSolution,R&S,yourreliablecooperator!一、细胞培养基本概念细胞培养定义细胞培养简史生长类型细胞形态传代次数Hightechnologyandservice,EyeingforIntegratedSolution,R&S,yourreliablecooperator!细胞培养定义定义：模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。优点：1．活细胞：同时、大量、均一性、
3、重复性；2．可控制：各种物理、化学、生物等因素可调控；3．研究方法多样：倒置、荧光、电子、激光共焦显微镜、流式细胞术、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记；4．应用广：不同物种、不同年龄、不同组织、正常或异常（肿瘤）；缺点：人工所模拟的条件与体内实际情况仍不完全相同；当细胞被置于体外培养后，生活在缺乏动态平衡的环境中，时间久了，必然发生变化。Hightechnologyandservice,EyeingforIntegratedSolution,R&S,yourreliablecooperator!细胞培养简史Hightechnologyandserv
4、ice,EyeingforIntegratedSolution,R&S,yourreliablecooperator!细胞类型按生长方式:贴壁型细胞（Monolayercells）悬浮型细胞（Suspensioncells）绝大多数有机体细胞属贴壁型细胞，只有少数细胞类型如某些肿瘤细胞和白细胞可在悬浮状态下生长。按细胞形态(贴壁细胞）：成纤维型细胞（Fibroblast-likedcells）上皮型细胞（Epithelium-likedcells）其它，不定型Hightechnologyandservice,EyeingforIntegratedSo
5、lution,R&S,yourreliablecooperator!成纤维型细胞梭形或不规则三角形中央有卵圆形核胞质向外伸出长短不同的突起中胚层间质起源上皮型细胞扁平不规则多角形细胞中央有圆形核紧密相连单层膜样生长内、外胚层细胞如皮肤、表皮衍生物、消化管上皮等游走型细胞散在生长，一般不连成片细胞质经常伸出伪足或突起活跃的游走或变形运动羊水细胞培养的早期多形细胞型难以确定规律和稳定的形态如神经组织的细胞等细胞形态Hightechnologyandservice,EyeingforIntegratedSolution,R&S,yourreliableco
6、operator!接触抑制（Contactinhibition）细胞相互接触时，将停止增长；细胞停留在细胞周期的G0期；转化的细胞却可以继续生长导致细胞重叠堆积生长。Hightechnologyandservice,EyeingforIntegratedSolution,R&S,yourreliablecooperator!体外培养的细胞增殖能力不是无限的，传代次数有一定的界限，称为“Hayflick极限”。传代次数与物种寿命有关：小鼠寿命3年，传代12次；龟寿命200年，传代140次。传代次数与个体年龄成反比：人胚胎，40-60代；幼年，20-40
7、代；成年，10-30代；早老病儿童，2-10代。细胞传代次数（PassageNumber）Hightechnologyandservice,EyeingforIntegratedSolution,R&S,yourreliablecooperator!Hightechnologyandservice,EyeingforIntegratedSolution,R&S,yourreliablecooperator!原代培养（primary culture）从动物机体取出的进行培养的细胞群。生长缓慢，繁殖一定的代数后（一般10代以内）停止生长。克隆（clone
8、）亦称无性繁殖系或无性系。对细胞来说，克隆是指由同一个祖先细胞通过有丝分裂产生的遗传性状一致的细胞群。细胞系
