盐酸克伦特罗荧光定量检测试剂盒质量的评价_葛怀礼

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1、中国畜牧兽医２０１４年第４１卷第１０期经验交流·２８５·盐酸克伦特罗荧光定量检测试剂盒质量的评价葛怀礼１，王莲２，李金卿２，郑百芹１，李爱军１，张建民１，董李学１（１．唐山市畜牧水产品质量监测中心，河北唐山０６３０００；２．力德力诺生物技术（北京）有限公司，北京１０００４４）摘要：本研究使用盐酸克伦特罗荧光定量检测试剂盒，基于免疫荧光层析原理，实现对猪尿中所含克伦特罗的定量检测，并对试纸条的灵敏度、准确度与精密度、特异性、稳定性等进行了初步的性能评价。结果表明，以四参数法对定量曲线进行拟合，线性系数为Ｒ２＝０．９９

2、９７２；检测限达到０．１μｇ／Ｌ；对３个不同浓度的添加回收试验，测得其回收率为８０％～１２０％；批内变异系数分别为１２．２％、１１．１％、１５．２％；与４种β－肾上腺素受体激动剂和８种常用的抗生素交叉反应率均低于０．０１％；同时验证了本试剂盒在１年的保存期限有效。整个检测过程只需１５ｍｉｎ。关键词：盐酸克伦特罗；荧光定量免疫层析法；检测中图分类号：Ｓ８５９．８文献标识码：Ａ文章编号：１６７１－７２３６（２０１４）１０－０２８５－０４盐酸克伦特罗（ｃｌｅｎｂｕｔｅｒｏｌ，ＣＬＢ），又称咳喘试剂盒采用荧光藻蓝蛋白（ｆｌ

3、ｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｐｈｙｃｏｃｙａ－素、瘦肉精，是一种人工合成的β－肾上腺素受体激动ｎｉｎ，ＦＰＣ）作为标志物。ＦＰＣ能发射强烈的荧光，具剂，其药理作用为松弛支气管平滑肌、增加肺活量、有很好的吸光性能和很高的量子产率，其荧光强度比降低气道阻力、增强支气管纤毛运动和促进痰液排常用的荧光素强３０倍，在可见光谱区有很宽的激发出，常作为支气管扩张剂用于防治哮喘、肺气肿等呼及发射范围。本研究通过从试验的检测限、添加回收吸系统疾病（Ｍｅｒｓｍａｎｎ，１９９８）。人食用了残留有试验、与其他药物的交叉反应及稳定性试验等方面对浓度

4、较高ＣＬＢ的动物组织会引起中毒，表现心跳加ＣＬＢ荧光定量检测试剂盒的质量进行评价，为荧光免快、血压升高、心悸、头痛、恶心、呕吐、手颤等症状，疫层析试剂盒在产品化推进方面提供有效参考。严重者出现抽搐、晕厥，对患有高血压、心脏病、甲１材料与方法亢、前列腺肥大的患者危害更大（曹晋蓉等，２００２）。１．１主要试剂与仪器盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、检测ＣＬＢ残留的方法目前主要有３种：高效液相色莱克多巴胺、盐酸特布他林、盐酸环仑特罗标准品均谱法（ＨＰＬＣ）、气相色谱—质谱法（ＧＣ－ＭＳ）和免疫购自德国Ｄｒ．Ｅｈｒｅｎｓｔｏｒｆｅｒ

5、ＧｍｂＨ公司；盐酸克伦分析技术（ＩＡ）。色谱仪器法检测过程繁琐，检测时特罗荧光定量检测试剂盒由力德力诺生物技术（北间长，需贵重仪器，难于操作，价格昂贵（Ｇａｕｓｅｐｏｈｌ京）有限公司提供。荧光定量分析仪购自力德力诺等，１９９８）。免疫分析技术应用较多的主要是胶体金生物技术（北京）有限公司；计时器。层析法（姜艳彬等，２０１０）和酶联免疫法。胶体金法１．２试验样本试验用猪尿样本均采自当地畜牧交是一种简单快速的定性检测方法，直接通过肉眼判易市场。经ＬＧ－ＭＳ法测定为盐酸克伦特罗阴性。定结果，其灵敏度低，易受环境、主观因素

6、的影响。１．３测定原理利用荧光免疫层析技术，采用竞争酶联免疫法的检测灵敏度要远高于胶体金法，但其法检测猪尿中的盐酸克伦特罗含量。将样本和含荧操作过程繁琐，一般需要多次的加样、洗涤，对操作光藻蓝蛋白标记的抗盐酸克伦特罗抗体缓冲液滴加人员专业技术要求也较高，容易在检测过程中因操至测试卡的加样孔中，在层析作用下反应复合物沿作不当导致结果不准确。基于免疫层析方法（崔浩着硝酸纤维素膜向前移动，包被在膜上的抗原与样等，２０１１）的基础上，试验研究的ＣＬＢ荧光定量检测本中的盐酸克伦特罗小分子竞争结合荧光标记的抗体。样本中所含药物

7、越多，膜上聚集的复合物则越修回日期：２０１４－０７－１４作者简介：葛怀礼（１９６３―），男，河北人，大专，高级工程师，研少，荧光信号强度便越弱。通过荧光定量分析仪扫究方向：畜产品质量安全检测。描荧光信号强度，与标准曲线所拟合的方程进行换通信作者：郑百芹（１９６４―），女，河北人，学士，研究员，研究方算，可得出样本中盐酸克伦特罗的浓度。向：畜产品质量安全检测。Ｔｅｌ：０３１５－７９０９１６８；Ｅ－ｍａｉｌ：ｔｓｓｙｚｚｂｑ＠１６３．ｃｏｍ１．４方法基金项目：唐山市农业科技成果转化资金项目（１３Ｇ０５）。１．４．１试剂

8、盒组成盐酸克伦特罗免疫层析试剂·２８６·经验交流中国畜牧兽医２０１４年第４１卷第１０期卡：检测卡类似于胶体金测试卡，以玻璃纤维为材质式中，ｙ为Ｔ／Ｃ因变量；ｘ为变量即标准品的样品垫、硝酸纤维素为材质的薄膜和吸水纸。硝浓度。酸纤维素膜上包被有盐酸克伦特罗人工合成的全抗１．４．４灵敏度测试灵敏度以检测限表示，按原ＣＬＢ－ＯＶＡ，作为检测线（Ｔ线）；再将羊抗兔Ｉｇ