参七虫草胶囊对慢阻肺大鼠模型γ-gcs活性及表达的影响

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1、引言境污染、药物治疗[支气管舒张剂（β2激动剂、抗胆碱药及甲基黄嘌呤类），抗菌药，糖皮质激素，祛痰药，抗氧化剂，免疫调节剂，疫苗，中医药等]、外科治疗、氧疗、康复治疗。住院期间加用机械通气疗法[6]。COPD多属中医咳嗽、喘证、肺胀的范畴，目前普遍认为其为本虚标实性疾病，本虚属肺脾肾虚，标实乃风（寒）热痰夹瘀[7]。COPD的治疗，应根据标本缓急的不同，在发作期急则治其标，以清热、化痰、化瘀等为法；在缓解期，则应以补益肺肾之法图其本[9]。导师从COPD的中医“本虚标实”病机（本虚为肺肾两虚，标实为血

2、瘀）出发，采用西洋参、三七、冬虫夏草等药组成参七虫草胶囊，该药具有益气养阴、活血化瘀、益肺固肾之功效，与COPD肺肾亏虚、血瘀内存的“虚瘀”机制相符合。在临床观察中发现该药可提高COPD患者的免疫功能；能显著地减少COPD患者的下呼吸道急性感染次数、发病持续时间及抗生素的应用时间；长期应用参七虫草胶囊对减缓COPD患者的肺功能下降有一定的作用[10]。动物实验结果表明其能调节干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)等炎症因子，从而抑制

3、气道的慢性炎症及气道壁结构的重塑，达到治疗作用[11][12]。本课题为国家自然科学基金项目《参七虫草胶囊逆转慢阻模型气道重塑的机理研究》（30472216）的一部分，给予COPD大鼠模型参七虫草胶囊干预，以金水宝胶囊作对照，测定血清GSH、活性氧（ROS）、总抗氧化能力（T-AOC）及γ-GCS的水平，检测肺组织中γ-GCS表达水平。通过对参七虫草胶囊对COPD大鼠模型γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）活性与表达的影响的研究来探讨其对COPD干预作用的机制。6参七虫草胶囊对慢阻肺大鼠模型γ-GC

4、S活性及表达的影响实验一参七虫草胶囊对慢阻肺大鼠模型肺组织形态学及肺功能的影响1.1材料1.1.1动物的选择与分组3月龄清洁级健康Wistar雄性大鼠50只，体重在200±20g之间，实验动物由郑州大学实验动物中心提供。随机分为5组，每组10只，即空白对照组，COPD模型组，金水宝胶囊组，参七虫草胶囊低剂量组，参七虫草胶囊高剂量组。1.1.2饲养环境动物饲养室为清洁级，室温控制在22±2℃，相对湿度为60﹪-80﹪，自然光线采光，清洁级饲料。适应性饲养7天后开始实验。1.1.3主要试剂与药品香烟：香梅

5、牌，烤烟型，焦油量14mg，烟气烟碱量11mg，由安徽中烟公司出产；脂多糖（LPS）来自HUALVYUANBIOTECHNOLOGY，批号为050730；注射用生理盐水：上海第一生化药业有限公司出品，批号为050210；1.1.4实验药物参七虫草胶囊（每粒0.4g）：安徽中医学院第一附属医院药剂科提供，由西洋参、参三七、冬虫夏草等药物组成，采用水提醇沉法，制成胶囊。批号为20050520；金水宝胶囊（每粒0.33g）：主要成份为发酵虫草菌粉，江西金水宝制药有限公司出品，批号为050313。1.1.5主

6、要仪器与设备徕卡2135型石蜡切片机OLIMPUSBX-51型显微镜OLIMPUSDP-70显微照相设备JSM—T300型扫描电镜ZeissEM10C型透射电镜小动物呼吸机动物体描箱7（德国徕卡公司）（日本OLIMPUS光学工业株氏社）（日本OLIMPUS光学工业株氏社）（省立医院病理科）（省立医院病理科）（北京贝兰博科技有限公司）（北京贝兰博科技有限公司）实验一参七虫草胶囊对慢阻肺大鼠模型肺组织形态学及肺功能的影响信号放大系统USB接口高速数据采集卡AniRes2003软件分析系统负压系统计算机小动

7、物熏烟箱80cm*60cm*50cm（北京贝兰博科技有限公司）（北京贝兰博科技有限公司）（北京贝兰博科技有限公司）（北京贝兰博科技有限公司）（惠普电脑有限公司）（安徽省中医院）1.2实验方法1.2.1造模方法第1、14天气管内滴入脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)，第2-13天、15-60天则每天熏香烟0.5h）[13][14]。气管内滴入脂多糖法：上午九点大鼠空腹状态下，以20﹪的乌拉坦（剂量为1ml/100g）腹腔注射麻醉大鼠后，将其头部后仰，颈背部用纱布垫垫起并固定于鼠板上。

8、修剪颈前部皮肤，碘酒酒精消毒。5号静脉注射套管针与皮肤成45度角斜行穿刺入气管，待有突空感并回抽出空气后，用1ml注射器抽取溶于生理盐水的LPS0.2ml（浓度为1mg/1ml），注入药液。随后将鼠板竖起，左右旋转使LPS药液尽可能均匀地分布于两肺。穿刺点再次碘酒酒精消毒。熏香烟法：每日上午九时将大鼠置入自制的有机玻璃熏烟箱内（大小为80cm×60cm×50cm，箱顶有一直径为1.2cm的通气孔），于箱内点燃10支香烟（香梅牌，烤烟型，焦油量14mg，烟