大鼠准分子激光术后角膜上皮下雾状混浊中Ⅰ型前胶原的测定

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1、大鼠准分子激光术后角膜上皮下雾状混浊中Ⅰ型前胶原的测定中文摘要目的探讨准分子激光手术后大鼠角膜的Ⅰ型前胶原变化情况，比较角膜非手术区、手术野透明区与haze区的Ⅰ型前胶原含量的差异，并做出时间含量曲线，对haze区的面积和程度与前胶原的含量做相关分析，为进一步研究其分泌、外环境及加工的酶含量和活性变化提供有力的理论支持。方法首先建立大鼠PRK手术模型，术后每日用裂隙灯显微镜观察大鼠角膜haze[1]的形成，并以Seiler5级分类标准分级。于术前、术后第1天、3天、7天、15天、1月、2月、3月处死大鼠，取出眼球并立即

2、在裂隙灯显微镜下用针刺标记出haze的范围，随即O将角膜取出，固定于标本保存液中。用HE染色法对胶原进行染色并在光镜下观察胶原结构形态。用鼠抗羊Ⅰ型前胶原的抗体结合SABC法检测与定位角膜Ⅰ型前胶原，光镜下观察其分布及量的变化，并用图像分析软件于不同的时间采集角膜非手术区、手术野透明区与haze区中Ⅰ型前胶原染色的光密度值，利用平均光密度值对它们之间Ⅰ型前胶原含量进行定量分析。结果我们观察到角膜的haze于术后15天开始出现，于术后2个月其分级达到最高，其分级与Ⅰ型前胶原含量有明显的相关性（r＝0.406，p＜0.05

3、），此后减弱有所消退，但不随Ⅰ型前胶原的含量下降而下降（r＝0.231，p＞0.05）；HE染色显示手术后15天角膜细胞发生明显的变化，出现了空泡，角膜基质的胶原纤维排列紊乱，极不规则，于haze标记处更为明显。用鼠抗羊Ⅰ型前胶原的抗体结合SABC法检测与定位角膜Ⅰ型前胶原，光镜下表现为Ⅰ型前胶原主要出现于细胞外基质中，细胞内未检测到明显的分布，正常角膜与手术区角膜中均有分布，但正常角膜中含量恒定，随时间延长其颜色逐步加深，特别在haze区，其染色与周围有明显的差异。用图像分析软件检测角膜Ⅰ型前胶原的光密度值表明，非手

4、术区角膜平均光密度值各时间段内的Ⅰ型前胶原的含量均无明显变化（p＞-1-0.05）；手术区角膜中的Ⅰ型前胶原含量于术后第三天开始显著增加（p＜0.05），随时间延长而含量逐步升高，于手术后两个月达到最高峰，3个月时Ⅰ型前胶原的含量明显下降但仍高于手术前及术后第一天（p＜0.05）。术后第15天、1月、2月、3月，haze区Ⅰ型前胶原的含量明显高于非haze区（p＜0.05），手术区较非手术区Ⅰ型前胶原的含量显著增多说明Ⅰ型前胶原参与了角膜的损伤修复过程，其含量随修复的进行而不断增加，在修复完成后，其含量开始下降；在ha

5、ze区较非haze的显著增加且与haze形成程度有明显相关性表明，Ⅰ型前胶原的异常增多是haze形成的重要原因，可能是导致的角膜胶原结构排列的紊乱，haze形成最主要的原因。结论1、Ⅰ型前胶原的含量增加可能是haze形成的主要因素之一。2、Ⅰ型前胶原的加工障碍致异常胶原形成可能是haze中胶原结构紊乱的主要原因之一。3、准分子激光手术后角膜的前胶原含量增加，为进一步研究其分泌、外环境及加工的酶含量和活性变化提供有力的理论支持。关键词：Ⅰ型前胶原；准分子激光手术；胶原结构；角膜上皮下混浊；细胞外基质；-2-Thedete

6、rminationofIPrecollagenonepithelialwoundhealingandstromalremodellingafterexcimerlaserkeratectomyinratcorneaObjectiveTostudythechangesofcornealIprecollagenonratsbyExcimerLasersurgery.AftercomparingthedifferenceofIprecollagencontentbetweennon-operationarea,transpa

7、rentcorneaareaandhazearea,thetimecontentcurveshouldbemade.Makingthecorrelationanalysisofthehazearea’sareaandthedegreeandtheprecollagencontenttofurtherstudyitssecretion,externalenvironmentandtheprocessingenzymecontentandtheactivechangetoprovidesthepowerfultheorys

8、upport.MethodsFirstly,thePRKsurgerymodelonratisestablished.Aftertheoperation,weobserverats’corneahazeformingbytheslitlampmicroscopeeveryday,andclassifythehazelevelbyS