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时间:2018-11-09
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1、大鼠角膜缘移植后角膜缘上皮中RANTES和MCP【关键词】移植物排斥ChangesofRANTESandMCP1expressioninepitheliumofcorneallimbusafterlimbaltransplantationinrats] 【Abstract】AIM:ToinvestigatedynamicexpressionsofRANTESandMCP1intheepitheliumofcorneallimbusafterlimbaltransplantandthEirrelationshipb
2、altransplantationandhealthyratsalcontrols.TheexpressionofRANTESandMCP1mRNARNAaftertransplantationalcontrolgroup(P<0.05).RANTESreachedpeakonPOD7andMCP1onPOD11andthendescendedconstantly.TheexpressionofRANTESandMCP1mRNARNAmaybehelpfultothediagnosisofrejections
3、andtheprognosis. 【Keybuscorneaetransplantation;chemokine;geneexpression;polymerasechainreaction 【摘要】目的:研究RANTES和MCP1在大鼠角膜缘移植模型中的动态表达,探讨其与移植排斥反应发生的关系.方法:将大鼠随机分为同种异体移植组(AG组)、自体移植组(SG组),并以健康大鼠作为正常对照组(N组),用定量竞争性RTPCR的方法,在术后(POD)1,4,7,11,14,21和30d分别检测各组大鼠RANTES和M
4、CP1mRNA的含量,并观察大鼠眼表变化,判断排斥反应的发生.结果:术后5d开始AG组出现排斥反应,8~10d达到高峰.RANTES和MCP1mRNA含量术后均大幅增加(P<0.05),RANTES于POD7达峰,MCP1于POD11达峰,随后均持续下降.POD1,4AG组与SG组RANTES与MCP1mRNA含量无差异,POD7~30均有明显差异.结论:动态检测RANTES和MCP1mRNA含量,可能有助于临床上对角膜缘移植排斥的诊断和对预后的估计. 【关键词】移植物排斥;角膜缘移植;趋化因子;基因表达;
5、聚合酶链反应 0引言 同种异体角膜缘移植术后排斥反应是导致手术失败的主要因素.调节激活正常T细胞表达和分泌细胞因子(regulatedonactivationnormalTexpressedandsecreted,RANTES),单核细胞趋化蛋白1(monocytechemotacticprotEIn1,MCP1)是CC(β)亚族趋化因子成员,能够通过趋化和激活单核巨噬细胞和淋巴细胞,参与调节机体的免疫应答[1].我们应用大鼠同种异体角膜缘移植模型,通过定量竞争性RTPCR检测移植术后不同时间角膜缘上皮中RAN
6、TES和MCP1mRNA含量变化,探讨两者与移植排斥反应之间的关系. 1材料和方法 1.1材料选用体质量为200~250g的雄性MLV逆转录酶、TaqDNA聚合酶购自Promega公司,dNTP购自TaKaRa公司,EcoRⅠ购自Gibco公司,HindⅢ购自华美公司,9个PCR引物由北京赛百盛生物公司合成. 1.2方法 1.2.1分组实验随机分为两组,每组10只大鼠,均为右眼接受手术.①同种异体角膜缘移植组(ills等[3]提出的评分方法判断排斥反应的发生,直至术后30d. 1.2.3取材和总RNA提取
7、①在术后(POD)1,3,7,11,14,21和30d,分别刮取各组角膜缘植床上皮,放入EP管中;②TRIzol试剂一步法提取总RNA,测A值定量RNA浓度,加入3倍体积的无水乙醇,-70℃保存. 1.2.4定量竞争性RTPCR按照Bertolotto等[4]的方法进行.①引物设计.RANTESS引物:5′ATCCCTCACCGTCATCCTC3′,A引物:5′GCTCATCTCCAAATAGTTGATGT3′,T引物:5′CGTCATCCTCCCTACCTCTCCCTCGCACT3′;MCP1(358bp),S
8、引物:5′TAGCATCCACGTGCTGTCTC3′,A引物:5′TGAGGTGGTTGTGGAAAAGA3′,T(270bp)引物:5′GTGCTGTCTCCGGCTGGAGAACTACAAGAGA3′;βactin(291bp),S引物:5′CTGGAGAAGAGCTATGAGCTG3′,A引物:5′AATCTCCTTCTGCATCCTGTC3′,T(
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