大鼠角膜缘移植后角膜缘上皮中rantes和mcp论文

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1、大鼠角膜缘移植后角膜缘上皮中RANTES和MCP论文【关键词】移植物排斥ChangesofRANTESandMCP1expressioninepitheliumofcorneallimbusafterlimbaltransplantationinrats【Abstract】AIM:ToinvestigatedynamicexpressionsofRANTESandMCP1intheepitheliumofcorneallimbusafterlimbaltransplantandtheirrelationshipbaltransplantationandhealthyrat

2、salcontrols.TheexpressionofRANTESandMCP1mRNARNAaftertransplantationalcontrolgroup(P0.05).RANTESreachedpeakonPOD7andMCP1onPOD11andthendescendedconstantly.TheexpressionofRANTESandMCP1mRNARNAmaybehelpfultothediagnosisofrejectionsandtheprognosis.【Keybuscorneaetransplantation;chemokine;geneexp

3、ression;polymerasechainreaction【摘要】目的：研究RANTES和MCP1在大鼠角膜缘移植模型中的动态表达，探讨其与移植排斥反应发生的关系.方法：将大鼠随机分为同种异体移植组（AG组）、自体移植组（SG组），并以健康大鼠作为正常对照组（N组），用定量竞争性RTPCR的方法，在术后（POD）1,4,7,11,14,21和30d分别检测各组大鼠RANTES和MCP1mRNA的含量，并观察大鼠眼表变化，判断排斥反应的发生.结果：术后5d开始AG组出现排斥反应，8~10d达到高峰.RANTES和MCP1mRNA含量术后均大幅增加（P0.05）.free

4、lRNA含量无差异,POD7～30均有明显差异.结论：动态检测RANTES和MCP1mRNA含量，可能有助于临床上对角膜缘移植排斥的诊断和对预后的估计.【关键词】移植物排斥；角膜缘移植；趋化因子；基因表达；聚合酶链反应0引言同种异体角膜缘移植术后排斥反应是导致手术失败的主要因素.调节激活正常Ｔ细胞表达和分泌细胞因子（regulatedonactivationnormalTexpressedandsecreted,.freelonocytechemotacticprotein1,MCP1）是CC（β）亚族趋化因子成员，能够通过趋化和激活单核巨噬细胞和淋巴细胞，参与调节机体的

5、免疫应答［1］.我们应用大鼠同种异体角膜缘移植模型，通过定量竞争性RTPCR检测移植术后不同时间角膜缘上皮中RANTES和MCP1mRNA含量变化，探讨两者与移植排斥反应之间的关系.1材料和方法1.1材料选用体质量为200~250g的雄性MLV逆转录酶、TaqDNA聚合酶购自Promega公司，dNTP购自TaKaRa公司，EcoRⅠ购自Gibco公司，HindⅢ购自华美公司，9个PCR引物由北京赛百盛生物公司合成.1.2方法1.2.1分组实验随机分为两组，每组10只大鼠，均为右眼接受手术.①同种异体角膜缘移植组(ills等［3］提出的评分方法判断排斥反应的发生，直至术后

6、30d.1.2.3取材和总RNA提取①在术后（POD）1,3,7,11,14,21和30d,分别刮取各组角膜缘植床上皮，放入EP管中；②TRIzol试剂一步法提取总RNA，测A值定量RNA浓度，加入3倍体积的无水乙醇，-70℃保存.1.2.4定量竞争性RTPCR按照Bertolotto等［4］的方法进行.①引物设计.RANTESS引物：5′ATCCCTCACCGTCATCCTC3′，A引物：5′GCTCATCTCCAAATAGTTGATGT3′，T引物：5′CGTCATCCTCCCTACCTCTCCCTCGCACT3′；MCP1（358bp），S引物：5′TAGCATCC

7、ACGTGCTGTCTC3′，A引物：5′TGAGGTGGTTGTGGAAAAGA3′，T（270bp）引物：5′GTGCTGTCTCCGGCTGGAGAACTACAAGAGA3′；βactin（291bp），S引物：5′CTGGAGAAGAGCTATGAGCTG3′，A引物：5′AATCTCCTTCTGCATCCTGTC3′，T（210bp）：5′GCCTTCCTTCCTGGGTATGGAATCCTGTGG3′.②RANTES和MCP1内标准的制备.提取正常大鼠肝脏总RNA，经逆转录后分别用RANTESS,RANTESA引物