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1、福D建OI农:1林0.大13学323学/j报.cn(k自i.然j.科fa学fu版(na)t.sci.).2003.04.019第32卷第4期JournalofFujianAgricultureandForestryUniversity(NaturalScienceEdition)2003年12月苏云金芽孢杆菌发酵培养基的筛选*李今煜,陈聪,关雄(福建农林大学生物农药中心,福建福州350002)摘要:采用正交试验对BtWB7菌株发酵培养基进行筛选,结果表明,不同原料对发酵液菌数影响相差较大,其中酵母粉和鱼粉影响最大.本试验获得的最佳摇瓶发酵配方为:玉
2、米粉4%、黄豆饼粉1%、酵母粉2%、鱼粉2.5%和蛋白胨0.1%(质量分数).关键词:苏云金芽孢杆菌;正交试验;发酵培养基中图分类号:Q939.97文献标识码:A文章编号:1006-7817(2003)04-0490-03ScreenoffermentativemediumforBacillusthuringiensisLIJin-yu,CHENCong,GUANXiong(BiocideResearchCenter,FujianAgricultureandForestryUniversity,Fuzhou,Fujian350002,China)A
3、bstract:AnorthogonaldesignwasusedtoscreenfermentativemediumofBacillusthuringiensisisolateWB7.Amongthesetests,yeastpowderandfishmealwerethemostefficientsubstratesforBt.Themostappropriatefermentativemediumiscomposedofcornmeal4%,soybeanflour1%,yeastpowder2%,fishmeal2.5%,peptone0.
4、1%.Keywords:Bacillusthuringiensis;orthogonaldesign;fermentativemedium[1]苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)培养基配方与发酵水平密切相关,决定着产品的杀虫效果和企业的经济效益.近年来,一些研究人员相继采用正交设计的方法对培养基组分和培养条件进行优化[2]筛选,取得了一定的成效.本试验室保存的WB7菌株不仅具有较高的杀虫活性,而且含有丰富的基因资源,具有良好的开发前景和研究价值.目前我室已研究的有cry、vip和几丁质酶基因.因此,本文以农副产品为主
5、要原料,采用正交试验的方法对该菌株进行发酵培养基的优化,确定适合于摇瓶培养的最佳配方.1材料与方法1.1供试材料1.1.1菌种BtWB7菌株为本室保存的菌株.1.1.2培养基和原料斜面及平板记数用LB培养基[牛肉膏1%、蛋白胨1%、琼脂2%、NaCl0.2%(质量分数)],灭菌前pH7.2.摇瓶发酵培养基原料由浦城绿安生物农药厂提供,其中黄豆饼粉由南昌汇通药业辅料有限公司生产,玉米粉由山东巨能电力集团金玉米开发有限公司生产,蛋白胨由仙游东风化工肥料厂生产,酵母粉由江门甘蔗化工厂生产,鱼粉购自浦城.上述原料使用时均过80目筛.1.2试验方法1.2.1
6、正交试验设计选择对Bt生长和发育影响较大的玉米粉、黄豆饼粉、酵母粉、鱼粉和蛋白胨等5个[3-7]培养基组分因素,根据前人的试验数据,每个因素设定3个水平,同时考虑玉米粉和黄豆饼粉、玉米粉和酵母粉的相互作用.7采用L18(3)正交表,随机安排因素和配比水平(表1).1.2.2摇瓶培养按正交试验设计表分别配制培养基,其它原料均为KH2PO40.2%、CaCO30.5%(质量分数)、pH7.5.-1使用250mL三角瓶,每瓶装液25mL,灭菌后接种,接种量为1%(体积分数).30℃下,185r·min收稿日期:2003-07-16基金项目:国家863计划
7、(2002AA245011)和福建省科技厅重大科技项目(2002N004)资助.作者简介:李今煜(1976-),女.研究方向:微生物分子生物学.*通讯作者.第4期李今煜等:苏云金芽孢杆菌发酵培养基的筛选49171)摇床振荡培养,定时取样涂片染色观察菌体长势及芽孢晶表1L18(3)正交试验因素水平表Table1L7体形成情况.芽孢晶体脱落率达到30%时停止培养.18(3)orthogonalexperimentalfactorlevels%1.2.3发酵液的活芽孢数测定用稀释平板记数法测定活因素水平ABCDE芽孢数.12.52.01.02.50.12
8、4.01.00.51.00.42结果与分析31.54.52.00.00.2从表2的结果和表3的方差分析可以明显看出,酵母1
