显微注射受精的卵母细胞质膜穿破类型与受精和卵裂的关系

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1、显微注射受精的卵母细胞质膜穿破类型与受精和卵裂的关系中华妇产科杂志1999年第11期第34卷论著摘要作者：李蓉　庄广伦　周灿权　张敏芳单位：510080广州，中山医科大学附属第一医院生殖医学研究中心　　自1995年12月,我院生殖医学研究中心开始采用卵母细胞单精子显微注射(intracytoplasmicsperminjection,ICSI)治疗严重男性因素及不明原因不育患者，至1998年1月16日，我中心已采用ICSI技术共治疗了156个周期的不育患者［1］。目前对影响ICSI结果的因素了解不多，ICSI的关键是将一条制动精子通过穿破的卵膜置于卵母细胞胞浆内,但卵膜的穿破形

2、式因人而异,甚至因不同的卵母细胞而异,这通常取决于操作技术环节和卵母细胞自身的特性。为此,我们就不同卵膜穿破形式对卵子的受精、卵裂情况的影响进行分析。　　一、资料与方法　　1.研究对象：为1995年12月至1998年1月,在本中心接受ICSI治疗的156个周期的不育患者(152例)，女方平均年龄为（31.2±3.8）岁(23～42岁),男方平均年龄为（33.9±4.8）岁(26～54岁),平均不育时间为（6.3±2.8）年(2～15年)。适应证为严重少、弱、畸精症或前次体外受精（IVF）周期的受精率低（＜20%）、阻塞性无精症患者［2］。　　2.方法：（1）卵母细胞及精液处理：

3、控制性促排卵采用本中心常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)方案［3］，注射人绒毛膜促性腺激素（hCG）36小时后，B超指导下经阴道取卵。取卵4～6小时，将卵母细胞置于透明质酸酶溶液中，进行去卵丘结构处理，选择成熟的卵母细胞进行ICSI受精，精液采用Peroll梯度离心法。根据显微注射过程中卵膜穿破的不同,将注射的成熟卵母细胞分为3组,A组：共307个卵，显微注射针穿刺卵母细胞膜过程中,注射针直接进入胞浆内,无需回吸胞浆；B组：共769个卵，注射针穿刺到胞浆深部时,轻微回吸少许胞浆,卵膜即穿破；C组：共405个卵，注射针穿刺到胞浆深部时,用力回吸一定量胞浆,卵膜才穿破。（2）观

4、察项目：应用英国RI公司的显微操作仪及显微注射仪，注射15～18小时后，检查有无原核，40～60小时后观察卵裂，将胚胎分为两级，a级为无核碎片＜50%，b级为无核碎片＞50%。经阴道宫腔内移植质量优良的胚胎4个。移植后2周进行妊娠试验，7周后B超检查有无胎心搏动。　　3.统计学处理：采用χ2检验。　　二、结果　　3组卵子存活率差异有显著性（P＜0.05）。操作过程中，A组的卵子存活率最低（72.6%），B、C组卵子存活率分别为91.7%及90.6%（P＞0.05），总卵子存活率为87.4%。　　以存活卵子计算受精率，3组分别为66.8%、68.5%及66.2%（P＞0.05），

5、总受精率为67.6%（见表1）。表1　卵膜穿破不同类型与受精和卵裂的关系组别卵子数　　（个）存活卵子正常受精卵裂数个数百分比　　（%）个数百分比　　（%）a级(%)b级(%)A组307223*72.614966.856**（42.0）77**（58.0）B组76970591.748368.5339(77.9)96(22.1)C组40536790.624366.2161（73.5）58（26.9）合计14811295　87.487567.6556(70.6)231(29.4)与B、C两组比较，*P＜0.05　　**P＜0.01　　A组的a级卵裂球数量最少，只有42.0%，B组最高

6、，为77.9%，C组为73.5%，A组与另两组的a级卵裂球数量比较，差异有极显著性(P＜0.01)。　　三、讨论　　在注射精子的技术和卵的质量均等的前提下，影响卵膜穿破的两个重要因素是卵膜的张力（或弹性）以及显微注射针的质量，另外透明带的硬度也会影响卵膜的穿破形式［4］。如果透明带较硬或注射针相对较粗而钝，将会在卵膜被刺破之前，透明带被注射针压迫成深陷入胞浆的八字型，当透明带最终被刺破时，注射针在瞬间“跃入”胞浆，从而出现A组的卵膜穿破类型，由于卵母细胞被压迫成八字型，再加上注射针突然刺入胞浆，细胞的显微结构被破坏，可能是A组卵子存活率低下的原因之一。但在多数的情况下，透明带的

7、穿破是不成问题的，故卵膜的穿破形式主要取决于卵膜的张力。卵膜的脆性越大就越容易导致A组的穿破类型。如果注射针一接触到卵膜，无需压迫，卵母细胞的卵膜就被穿破，这些卵母细胞多数立即变黑以致死亡，即使存活也不受精，这是A组卵子存活率低下的另一个主要原因。　　机械性去卵丘过程也是决定卵膜穿破类型的因素之一。洗卵针的口径太小，对卵母细胞的压迫太强，将损伤细胞的骨架结构，也是导致A组类型穿破的原因之一。　　B、C组穿破的卵母细胞，卵子存活率明显高于A组，提示对卵膜的适当压迫后再进入胞浆的操作过程，有利于