BJS 201905 食品中罗丹明B的测定

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1、食品中罗丹明B的测定BJS2019051范围本方法规定了食品中罗丹明B的液相色谱测定方法及液相色谱-质谱/质谱确证方法。本方法适用于半固态调味料、花椒及花椒粉、花椒油、牛肉干、蜜饯、水果干制品中罗丹明B的测定和确证。2原理试样中罗丹明B用含酸的甲醇水溶液提取后，经混合型阳离子固相萃取小柱净化，采用液相色谱荧光检测器检测，外标法定量。试样中检出罗丹明B后采用液相色谱质谱/质谱法进行确证。3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。3.2乙腈（C2H3N）：色谱纯。3.3甲酸（CH2O2）：色谱纯。3.4氨

2、水（NH₃·H₂O）：色谱纯。3.5含0.1%甲酸的水溶液:取甲酸（3.3）1mL用水稀释至1000mL，用滤膜（0.22μm，水相）过滤后备用。3.650%甲醇水溶液:准确量取500mL甲醇（3.1）于1L容量瓶中，用水定容至刻度。3.7含0.1%甲酸的甲醇水溶液：取1mL甲酸（3.3），用甲醇水溶液（3.6）稀释至1000mL。3.8含0.1%甲酸的乙腈溶液：取1mL甲酸（3.3），用乙腈（3.2）稀释至1000mL，滤膜（0.22μm，有机相）过滤后备用。3.9含0.1%甲酸的乙腈水溶液：取0.1mL甲酸（3.3）和35mL乙腈（3.2），用水稀释至100mL，混匀。3.

3、10含5%氨水的甲醇溶液：取5mL氨水（3.4），用甲醇稀释至100mL，混匀。（临用现配）3.11罗丹明B标准品：罗丹明B标准品的分子式、相对分子量、英文名称、CAS登录号见表1，纯度≥99%。表1罗丹明B标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量罗丹明BRhodamineB81-88-9C28H31ClN2O3479.013.12罗丹明B标准储备液：准确称取罗丹明B标准品10mg（精确至0.0001g），置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成浓度为100μg/mL的标准储备液。溶液转移至试剂瓶

4、中，置于-18℃避光保存，有效期为6个月。3.13中间标准溶液：准确移取0.5mL罗丹明B标准储备液（3.12）于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀，此溶液的浓度为500ng/mL。置于4℃避光保存，有效期为1个月。3.14标准工作溶液：用含0.1%甲酸的乙腈水溶液（3.9）将中间标准溶液（3.13）稀释成0.0ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL的标准工作溶液。临用现配。3.15混合型阳离子固相萃取柱（60mg/3mL）：基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物

5、，或相当者。使用前依次用3mL甲醇，3mL水活化。3.16陶瓷均质子。4仪器和设备4.1液相色谱仪：配荧光检测器。4.2液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI源）。4.3旋涡混合器。4.4离心机：转速≥8000r/min。4.5电子天平：感量分别为0.0001g和0.01g。4.6具塞离心管：50mL。4.7组织捣碎机。4.8固相萃取装置。5试样制备与保存5.1半固态调味料取适量样品，捣碎，混匀，常温保存备用。5.2花椒及花椒粉取适量样品，粉碎后过40目筛，常温保存备用。5.3花椒油充分混匀，常温保存备用。5.4牛肉干取适量样品，捣碎，混合均匀，冷藏保存备用。5.5蜜

6、饯、水果干制品取适量样品，捣碎，混合均匀，冷藏保存备用。6测定步骤6.1试样前处理6.1.1提取：准确称取2g（香辛料样品称取1g，精确至0.01g）试样置于50mL塑料离心管中，准确加入10.0mL含0.1%甲酸的甲醇水溶液（3.7），混匀，加入陶瓷均质子两颗（调味油试样除外），于旋涡混匀器上涡旋15min，于8000r/min离心10min，取3mL提取液层溶液过0.45μm有机相滤膜后待净化。6.1.2净化：准确移取1.0mL提取液（6.1.1）至固相萃取柱（3.15）中，依次用3mL0.1%甲酸水溶液（3.5）、3mL水、3mL甲醇淋洗固相萃取柱。用6mL氨水甲醇溶液（

7、3.10）洗脱目标物，并收集洗脱液，洗脱溶液在45℃下，用氮气吹至近干，残渣用1.0mL0.1%含酸的乙腈水溶液（3.9）溶解（香辛料样液残渣用0.5mL溶解），过0.22μm有机相滤膜上机测定。6.2仪器参考条件a)色谱柱：C18柱，4.6mm×100mm，粒径3.5µm，或性能相当者。b)流动相：A为0.1%甲酸水溶液（3.5），B为乙腈（3.2），梯度洗脱程序见表2。c)流速：1.0mL/min。d)柱温：35℃。e)进样量：10μL。f）激发波长：550nm；发射波长：580nm。表