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《大鼠肾小球系膜细胞系的建立及ISPI对其细胞周期蛋白的调控作用研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、华中科J之大学同济医学院博士学位论文。前言大鼠肾小球系膜细胞系的建立及ISP-I对其细胞周期蛋白的调控作用研究目吐舀肾小球系膜细胞(GlomendarMesangialCell,GMC)在肾脏的组织结构及其生理功能等方面起着十分重要的作用。GMC和细胞基质共同构成了肾小球系膜，它是维持肾小球毛细血管拌的结构基础。GMC具有支持和保护作用，能产生细胞外基质，参与调节肾小球的滤过、免疫反应、炎症反应等多种生理功能。体外培养GMC是研究肾功能和肾小球疾病的产生、发展必不可少的手段之一。由于GMC在体外培养难度大，耗费财力和时间，建立一株永生系有利于
2、研究工作的顺利开展。SV40(非洲绿猴肾细胞病毒)能转染啮齿类动物或哺乳动物二倍体细胞使之永生化。迄今为止，研究者应用SV40已成功建立了多株永生化细胞系Ol我们应用SV40病毒稳定转染大鼠GMC，并成功建立了一株具有密度依赖性、锚着依赖性、血清依赖性、无非整倍体异常DNA核型、无裸鼠致瘤性、具有正常表型的大鼠肾小球系膜细胞永生系。GMC增生、肥大并最终纤维化是肾脏疾病慢性进展的共同细胞学特征。肥大GMC可产生大量1,III.IV型胶原及laminin、纤维结合蛋白等细胞外基质并导致肾小球硬化[21。伴随着GMC增生、肥大过程中的细胞一基质结
3、构的重塑是肾脏疾病进展的关键。细胞的增生、肥大由细胞周期调节蛋白最终决定[31。细胞周期中起调控作用的是细胞周期蛋白(Cyclin)、细胞周期蛋白依赖性激酶(Cyclindependentkinase,CDK)和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子141(CDKinhibitors,CDKD.Cyclin与CDK结合形成的Cyclin-CDK复合物在不同细胞周期的有序表达及其磷酸化与去磷酸化状态，调控细胞周期时相的转换。Cyclins的表达水平是华中科技大学同济医学院博士学位论火。前言Cyclin-CDK活性高低的主要决定因素，因而Cyclins的
4、有序消长，决定了各细胞周期时相内Cyclin-CBK的激活与失活。通过干预细胞周期调节蛋自，可以调控细胞的增披和肥大。冬虫夏草〔Cordycepssinensis)及其提取物具有双向免疫调节作用及强大的肾脏直接作用，在肾脏疾病防治方面有独到的功效。ISP-1[(2S,3R,4R)-2-amino-3,4-dihydroxy-2-hydroxymethyl-14-oxoeicos-6-enoicacid,myriocin“thermozymo-cidin]是日本学者Fujitat't从虫草中纯化出的结构独特、作用强大的免疫活性分子，是一种新型免
5、疫抑制剂，极可能是虫草治疗肾脏疾病的物质基础。ISP-1具有高度细胞选择性，抑制GMC增生并诱导凋亡。其作用机理尚不详，初步认为ISP-1对活化的GMC不仅有直接抑制作用，还可通过调节细胞周期调节蛋白，抑制其增殖。我们应用ISP《作用于被IL-I.IL-6激活的GMC161，检测细胞周期蛋白的变化，以探讨ISP-1对GMC细胞周期的调控机制。在细胞培养过程中，我们尝试应用原子力显微镜(AtomicForceMicroscopy,AFM)这种新方法来观察和研究GMCaAFM是1986年GerdBinning和HeinrichRohrert''s
6、)在共同研制的扫描隧道显微镜(ScanningTunnelingMicroscopy,STM)基础上研制成功的。STM使人类第一次能够实时观察单个原子在物质表面的状态和与表面电子行为有关的物理化学性质，而AFM让人们对生命的认识深入到了原子级或纳米级水平的超微观领域，开拓了生命科学研究的崭新途径。近年来，Hansma.BractF等(9,ion应用原子力显微镜技术在细胞超微结构方面的研究，使科学家能够在原子级或纳米级水平实时细致地观察和研究细胞的亚显微形态。我们应用这个新技术观察研究了大鼠GMC活细胞的亚显微结构和细胞骨架承载力的变化，为GM
7、C及活细胞的超微研究开辟了新方法。华中科技大学同济医学院博士学位论文·前言参考文献1.ShanklandSJ,WolfGCellcycleregulatoryproteinsinrenaldisease:roleinhypertrophy,proliferationandapoptosis.AnJPhysiol,2000;278:F5152.PardeeAB.G,eventsandregulationofcellproliferation.Science,1989;246:6033.KobayashiO,SakaguchiM,OkitsuT,
8、etal.Improvementinthediferentiatedhepaticphenotypeofimmortalizedhumanhepatocytesby
