肾脏telocyte细胞系的建立及功能研究

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1、复旦大学博士学位论文肾脏Telocyte细胞系的建立及功能研究姓名：戚贵生申请学位级别：博士专业：外科学指导教师：朱同玉2012-04-02肾脏Telocyte细胞系的建立及功能研究中文摘要目的：分离培养鉴定人及大鼠。肾脏Telocyte细胞(TC)，并研究其分布、形态、超微结构、免疫表型：建立人及大鼠肾脏TC细胞系；探索TC对于。肾小管上皮细胞(TubularEpithelialCell，TEC)增殖和凋亡的影响：验证间充质干细胞(MesenchymalStemCell，MSC)通过旁分泌方式促进。肾小管上皮细胞增殖并抑制其凋亡的作用；揭示TC作为MSC支持细胞的作用机制；研究TC与MSC细

2、胞对话在肾脏损伤修复中的作用。方法：利用原代细胞培养、免疫组织化学、透射电镜等方法发现人及大鼠。肾脏TC并了解其形态、分布及超微结构；利用细胞免疫荧光、活细胞染色及线粒体标记等方法鉴定肾脏TC；通过差时贴壁、显微切割、传代等细胞培养技术纯化肾脏TC并建立TC细胞系；利用Cell—IQ技术探索TC生长规律及作为干细胞支持细胞的功能相关性形态学特征；利用成骨及成脂诱导液对肾脏TC进行体外诱导分化；培养大鼠MSC细胞，并利用流式细胞仪、诱导分化等方法进行MSC鉴定：利用MillicelllM系统建立共培养体系，实现大鼠肾脏TC与TEC的共培养、TC与MSC的共培养、MSC与TEC的共培养，探索TC作

3、为MSC支持细胞的作用机制：建立大鼠肾脏缺血再灌注动物模型，通过阴茎背静脉给予TC共培养预处理的MSC，利用肾脏损伤病理评分及TUNEL评分研究TC与MSC细胞对话在肾脏损伤修复中的作用。结果：人及大鼠肾脏皮质中存在TC，TC常位于肾小管及小血管周围间质，紧密包绕肾小管或间质小血管；肾脏TC具有特殊的形态特征，细长串珠样的突起Tp，Podom及Podomer结构明显，胞内线粒体发达，富含分泌性囊泡及致密颗粒，表达CDl17、CD34及Vimentin，不表达CD3l、D2—40及Tryptase；TEM及IHC未发现肾脏髓质中存在TC，但髓质标本原代培养可观察到TC，其占总细胞总数的比例较皮质

4、小；肾脏TC稳定传代至40代，表型稳定；肾脏TC的体外诱导分化未显示其成脂及成骨潜能；MSC与TEC共培养可显著促进TEC的增殖并抑制其凋亡，且MSC对TEC的促增殖抑凋亡作用通过旁分泌方式实现：TC与TEC共培养不能直接促进TEC的增殖或抑制其凋亡；经与TC共培养预处理的MSC，其对TEC促增殖抑凋亡的作用较单纯MSC的效果显著增强，提示TC可以通过旁分泌方式增强MSC的肾脏保护作用；经阴茎背静脉给予TC预处理的MSC可显著减轻肾脏缺血再灌注损伤，改善肾功能。结论：人及大鼠肾脏皮质中存在TC，其形态特征、免疫表型均符合经典TC标准；成功建立肾脏TC细胞系；TC可作为一种干细胞支持细胞，通过旁

5、分泌方式增强MSC的肾脏保护作用；经与TC共培养预处理的MSC显著减轻肾脏的缺血再灌注损伤，提示TC可作为MSC支持细胞促进肾脏的损伤后修复。关键词：Telocyte；Telopode；肾间质；MSC；缺血再灌注损伤中图分类号：R692．6LineconstructionancIIUnctioneXDloratlon0Ian0Vel一·‘1一·‘■J●一●锣peofkidneyinterstitialcell-TelocyteAbstractobjectives：Toisolate，identifyandcultureTelocyte(TC)inkidney．Tounveilthedistri

6、bution，morphologicalprofiles，ultrastmcture，phenotypeofkidneyTCs．TopurifykidneyTCandconstructTCcellline．ToidentifywhetherTCisakindofstemcell．ToexploretheinfluencesofTContheproliferationandapoptosisoftubularepithelialcell(TEC)．Toverifytheparacrineeffectofmesenchymalstemcell(MSC)ontheproliferationandap

7、optosisofTEC．TodetectwhetherTCscaninfluencetheprotectioneffectofMSCinkidneyasakindofstemcellsupportingcell／nvitro；TostudythemechanisiminvolvedinthecommunicationbetweenTCsandMSCs：Tochecktheprotectionef