哇巴因诱导Jurkat增殖和钠泵信号传导的研究

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1、华中科技大学硕士学位论文哇巴因诱导Jurkat增殖和钠泵信号传导的研究姓名：白燕申请学位级别：硕士专业：儿科血液指导教师：郑孝清;金润铭2003.4.14#中科技人学I叫济医学院_li页1。研究生毕业论义畦巴因诱导Jurkat细胞增殖及钠钾泵信号传导的机制研究硕士学位申请者白燕导师郑孝清金润铭中文摘要第一部分k'2j

2、R’；≥1_f【目的】哇巴因是存在于动植物体内的洋地黄类物质，山于它能特异性抑制细胞膜钠钟泵的功能，一直被用做研究钠钟泵功能的1：具药。而近年来发现哇巴因是源于肾上腺皮质的激素，除了引起细胞内外离子浓度的改变，还对多种细胞的生长调节有影响作用。目

3、前国内外对畦巴因调节细胞生长作用的研究还在起步阶段。为了了解畦巴因对造血细胞生长是否有影响，我们采用急性淋巴细胞白血病细胞株JUrkat—_—一一——-h——__、-—_，——一作为研究对象，观察哇巴因对Jurkat细胞的作用，并探讨其机制。，f【方法】用细胞计数，MTT等方法检测哇巴因对Jurkat＼生长的调控作用，用RT—PCR，WesternB10t等方法测定反映细胞增埴的c—myc基因mRNA的合成及c．Myc蛋白的表达，用流式细胞仪检测了哇巴凶对细胞周期的影响。【结果】我们用细胞计数和MTT法测定Jurkat细胞的增殖，扛中科技人学问济

4、廷学院坝I删

5、宄生毕业论立与对照组相比，结果有显著差异(P

6、N胞c．myc基因c．Myc蛋白陆期彬第二部分【目的】钠泵是广泛存在于动物细胞膜上的钠钟离子转运系统，也是畦巴因的细胞膜受体。近年来有研究表明钠泵可参与信号传导，从而介导哇巴因调节细胞生长的作用。我们用Jurkat细胞作为研究材料，进一步阐明哇巴因的作用机制及钠泵可能参与的信号传导途径。，f【方法】用WesternBlot方法检测加入哇巴因后Jurkat细胞膜酪氨酸磷酸化水平和ERKl／2的磷酸化程度；分别用MEK．抑制剂PD98059、Src激酶抑制剂PP2、酪氨酸激酶抑制剂HerbimycinA、表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂PP3预先孵育Jurkat

7、细胞，再加入低浓度哇巴因刺激，用MTT法测细胞增贿率，并检测ERKl／2的磷酸化水平。【结果】哇巴因促使Jurkat细胞膜酪氨酸磷酸化水平增高，．2．。扛中科技人学川济医学院坝I：li』f究生毕业论文并活化了ERKl／2。进一步研究显示，MEKl抑制剂PD98059、jE特异性酪氨酸激酶抑制剂HerbimycinA、Src激酶抑制剂PP2和EGFR抑制剂PP3均可不同程度阻断哇巴因诱导的ERKl／2的活化，与此同时，这些抑制剂可阻止哇巴因诱导的Jurkat细胞的增殖。【结论】低浓度哇巴因激活了钠泵的信号传导功能，引起细胞膜酪氨酸磷酸化水平增高，MAPK(ERK

8、l／2)信号途径级联样活化，从而导致nlrkat细胞的增殖反应。Sre激酶和EGFR参与了钠泵介导的信号传导。【关键词耻巴因Jurkat细月矿‘钠琴(MAPK(ERKl／妙结号途径／酪氨酸磷酸化EGFR(表皮生长因子受体fSrc激酶：!!!!!垫叁兰型堕堕堂堕塑．!：堑塑竺!、业堡兰—一OuabainInducesJurkatCellsProliferationandtheStudyoftheMechanismofNa·K．ATPaseSignalTransductionPOstgraduateBaiYanSupervisorProf．ZhengXiaoqin

9、gProf．JinRunmingAbStractPartI【Object】Ouabainisadigitalis一1ikefactorwhichexistsinP1antsandanimalsOuabaillisalwaysusedtobet001drugtostudYthefunctionofNa，K—ATPasewhichfunctioncanbetiPicaIlYinhibitedbYouabainRecentlY，itisfoundthatOHabainisoneofendogenoushormonesfromadrenalgland．Exceptth

10、alouabaincaninducet