微生物实验01-革兰染色

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1、医学微生物学实验（一）讲课教师：张戎基础医学院病原生物学系zhangrong@njmu.edu.cn实验内容讲解：实验室规则、显微镜的使用、细菌的形态、特殊结构、细菌的变异、细菌的生化反应录像：细菌感染的检查方法与防治原则操作：革兰染色一、实验室规则1.带学生证、红蓝铅笔和实验报告2.穿好白大褂3.不能在实验室吃东西、喝水4.实验操作时收起书本，避免污染5.物品按指定地点存放、丢弃（万一菌液打翻、溅出立即汇报老师处理）6.多动手、多观察、认真撰写实验报告7.课后洗手泡手、打扫实验室卫生二、显微镜的使用结构：四个物镜：黄色---低倍（10×

2、）白色---油镜（100×）使用方法：载物台上固定载玻片→粗螺旋调至最低→低倍镜下找到标本→移开低倍镜,在视野中央滴加香柏油（一滴）,转换油镜→调节细螺旋,光线调亮，油镜下观察。保护：拿取：双手（一手持镜背,另一手托镜座）清洁：使用完毕立即用擦镜纸擦干镜头上的油三、细菌的形态体积微小：以m为单位，用显微镜观察形态：球菌杆菌螺形菌球菌coccus双球菌链球菌葡萄球菌杆菌bacillus棒状杆菌分枝杆菌球杆菌链杆菌螺形菌spiralbacterium弧菌：一个弯曲螺菌：多个弯曲四、细菌的结构基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、核质特

3、殊结构：荚膜、鞭毛、菌毛、芽胞荚膜Capsule荚膜是细胞壁外围绕的一层粘性、胶冻状的物质，不易着色。染色：特殊染色或墨汁负染。形成：在营养丰富的条件下（如机体内）。功能：抗吞噬作用；黏附；潴留水分，抗干燥。鞭毛Flagellum鞭毛是菌体上的细长而弯曲的丝状物。类型：数目、位置、排列功能：运动器官具有抗原性鞭毛Flagellum鞭毛极细，需用特殊染色法使鞭毛增粗着色，才能在光学显微镜下看到。（示教需仔细观察）菌毛Pilus菌毛是细菌表面的比鞭毛更细、短、直、硬的丝状物；光镜下看不见，需用电镜。功能：普通菌毛：遍布细菌表面，是细菌的黏附结构

4、，增加致病性；性菌毛：1-4根，传递DNA，传递细菌的毒性和耐药性。芽胞Spore芽胞是菌体内圆形或卵圆形的不易着色的小体。形成：在营养缺乏的条件下。功能：是处于代谢相对静止的休眠体，不是繁殖体。芽胞Spore菌种不同，芽胞的形状、大小、在菌体中的位置不同，有助于细菌的鉴别。破伤风梭菌：正圆形，比菌体大，肉毒梭菌：椭圆形，比菌体大，位于菌体顶端，呈鼓槌状位于菌体次末端，呈网球拍状炭疽杆菌：卵圆形，比菌体小，位于菌体中央，呈链状芽胞Spore具有多层厚而致密的包膜结构，阻挡理化因素的透入，抵抗力强大，一般方法不易杀死，作为灭菌的指标。五、细菌

5、的变异形态结构变异:L型细菌（细菌细胞壁缺陷型）荚膜变异鞭毛变异：H→O变异芽胞变异生理性状变异：菌落变异：S→R变异毒力变异耐药性变异鞭毛变异（H→O变异）细菌的鞭毛在某些情况下，可以消失而变成没有鞭毛的细菌。H菌落→O菌落（hauch，薄膜）（ohnehauch，无薄膜）示教平板：变形杆菌H0.1%石炭酸O（迁徙生长）（单个菌落）H-O变异H菌落O菌落迁徙生长点状生长变形杆菌在0.1%石炭酸上生长菌落变异（S→R变异）在陈旧培养基中长期培养或在有免疫力的人体内光滑型菌落（Smooth,S型）粗糙型菌落（Rough,R型）表面光滑

6、有光泽，边缘整齐。表面粗糙而暗淡，边缘不整齐。毒力强毒力减弱或无毒力六、细菌的生化反应根据细菌具有不同的酶，分解不同营养物质，代谢产物不同，（酸碱、气）用生物化学方法来检测和鉴定细菌。称为细菌的生化反应常见的生化反应对蛋对VP试验白吲哚试验糖质的甲基红试验的发发硫化氢试验单糖发酵试验酵酵其尿素酶试验他试验枸橼酸盐利用试验常用酸碱指示剂名称酸色中性色碱色中性红红红黄酚红黄红红酸性复红红黄黄溴甲酚紫黄紫紫1.糖发酵试验测定各种细菌分解糖（醇）类的能力和代谢产物。葡、乳、麦、甘、蔗+－㊉产酸产气：指示剂变色，小倒管内㊉有气泡产酸：指示剂变色，+不

7、分解糖：指示剂不变色，－指示剂为溴甲酚紫2.靛基质试验（吲哚试验）色氨酸↓分解吲哚（靛基质）无色↓加入对二甲基氨基苯甲醛玫瑰吲哚红色，+黄色，-－＋3.硫化氢试验含硫氨基酸↓分解HS2↓遇到铅盐或铁盐FeS或PbS黑色沉淀，＋不变色，－－＋4.尿素酶试验某些细菌具有尿素酶，能分解尿素形成大量的氨，使培养基PH上升呈碱性，使指示剂变色。☞指示剂为酚红+：深红色-：淡红色•细菌生化微量反应管全自动生化反应仪API50CHL指示剂为溴甲酚紫-：紫色+：黄色－+七、细菌的色素水溶性色素：脂溶性色素：能弥散至培养基或周不溶于水，仅使菌落显围组织使

8、之着色，如色而培养基颜色不变，铜绿假单胞菌。如金黄色葡萄球菌。八、细菌感染的检查方法（大小、形态、染色、排列、特殊结构）细菌的分离培养与鉴定“金标准”细菌学诊断采集血清血清学（双