微生物实验课件：细菌接种+革兰染色+抗酸染色+倍比稀释.ppt

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1、一、细菌接种目的要求：掌握细菌的接种技术、培养方法。接种方法：分离培养：平板分区划线接种纯培养：斜面接种、液体接种、半固体接种实验材料：混合菌液、纯培养细菌等。1区4区3区2区烧接种环平板分区划线接种目的：分离细菌实验方法：1区接种2区接种3区接种4区接种标记，37℃，24h。实验结果：单个菌落描述（大小，形态，边缘，表面，颜色，透明度）平板分区划线接种液体接种目的：增殖细菌实验方法：1、接种环烧灼灭菌，取菌；2、培养管去塞，倾斜；3、接种环在上液面靠近管壁处研磨；4、塞上塞子，标记，37℃培养24h。液体接种实验结

2、果：表面生长或均匀混浊生长或沉淀生长表面生长均匀混浊生长沉淀生长目的：增殖细菌和保存细菌斜面接种实验结果：均匀一致的菌苔实验方法：1、接种环烧灼灭菌，取菌；2、培养管去塞，倾斜；3、接种环从斜面底部向上划直线；4、围绕直线从下向上划蛇形曲线；5、塞上塞子，标记，37℃培养24h。目的：鉴定细菌有无鞭毛（动力实验）半固体接种实验方法：1、接种针烧灼灭菌，取菌；2、培养管去塞；3、接种针从培养基表面中央垂直插入，离管底1-2cm；4、接种针原路返回；5、塞上塞子，标记，37℃培养24h。结果•生长现象–仅沿穿刺线生长（动

3、力试验-）–向四周扩散（动力试验+）平板分区划线(金大混合菌)每人一个斜面接种（金/大）两人一支液体接种（金/大）两人一支半固体穿刺（大/痢）两人一支革兰染色法一、实验目的掌握革兰染色的操作技术及油镜的使用。二、实验原理1、G+菌肽聚糖层数多，结构致密，不易脱色。2、G+菌等电点较低，在碱性染料中带较多负电荷，与碱性染料结合力牢固，不易脱色。三、材料与器材菌种：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌革兰氏染色液载玻片、酒精灯、显微镜。四、实验方法1、制片（涂片，干燥，固定）2、初染（革兰Ⅰ液1min，水洗）结晶紫3、媒染（革兰Ⅱ液

4、1min，水洗）卢戈碘液4、脱色（革兰Ⅲ液20s，2次，水洗）95%酒精5、复染（革兰Ⅳ液30s，水洗）稀释石炭酸复红6、滤纸吸干玻片水分7、镜检（油镜）实验结果G+菌G-菌染色：形态：排列方式：二、抗酸染色1.原理:分枝杆菌脂质(分枝菌酸)含量高,与石炭酸复红结合力牢固，能抵抗3%盐酸酒精的脱色呈红色。非抗酸菌易被脱色,被碱性美兰染成蓝色。2.材料:抗酸染液和含BCG（卡介苗）痰液3.方法:(1)制片:取痰液（3-4环），涂片，固定。(2)染色:A.滴加石炭酸复红（加热，维持5min)，水流冲洗；B.滴加3%盐酸酒

5、精（30s），水流冲洗；C.滴加碱性美兰（1min），水流冲洗，吸水纸吸干，油镜检。Methods制片，干燥，固定。初染:抗酸I液覆盖标本，加热5min。(注:至蒸汽产生,勿煮沸,及时添加染料)冷却后细水流冲洗。脱色:抗酸II液30sec，细水流冲洗。4.复染：抗酸III液1min，细水流冲洗。5.吸水纸吸干，油镜镜检。试管号123456······910生理盐水0.90.250.250.250.250.25···0.250.25病毒液0.10.250.250.250.250.25···0.25---病毒稀释度1:1

6、01:201:401:801:1601:3201:2560对照0.5%鸡红细胞0.250.250.250.250.250.25······0.250.25摇匀，静置于室温30～60min（垫白纸）结果：观察红细胞凝集现象3.方法以镊子击破鸡胚气室蛋壳，撕去绒毛尿囊膜，吸取尿囊液于试管备用。按下表操作：一、病毒血凝实验弃0.25弃0.5试管号12345678生理盐水0.50.50.50.50.50.50.50.5病毒液0.50.50.50.50.50.50.5弃0.5病毒稀释度1:21:41:81:161:321:64

7、1:128对照0.5%鸡红细胞0.50.50.50.50.50.50.50.5摇匀置室温50min以上结果3.方法以镊子击破鸡胚气室蛋壳，撕去壳膜，吸取尿囊液按下表操作(ml)：一、病毒血凝实验