微生物实验课件：细菌接种和抗酸染色.ppt

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1、一、细菌接种二、抗酸染色实验内容一、细菌接种目的要求：掌握细菌的接种技术、培养方法。接种方法：分离培养：平板分区划线接种纯培养：斜面接种、液体接种、半固体接种实验材料：混合菌液、纯培养细菌等。1区4区3区2区烧接种环烧接种环烧接种环平板分区划线接种目的：分离细菌实验方法：1区接种2区接种3区接种4区接种标记，37℃，24h。实验结果：单个菌落描述（大小，形态，边缘，表面，颜色，透明度）平板分区划线接种液体接种目的：增殖细菌实验方法：1、接种环烧灼灭菌，取菌；2、培养管去塞，倾斜；3、接种环在上液面靠近管壁处研磨；4、塞上塞子，标记，3

2、7℃培养24h。液体接种实验结果：表面生长或均匀混浊生长或沉淀生长表面生长均匀混浊生长沉淀生长目的：增殖细菌和保存细菌斜面接种实验结果：均匀一致的菌苔实验方法：1、接种环烧灼灭菌，取菌；2、培养管去塞，倾斜；3、接种环从斜面底部向上划直线；4、围绕直线从下向上划蛇形曲线；5、塞上塞子，标记，37℃培养24h。目的：鉴定细菌有无鞭毛（动力实验）半固体接种实验方法：1、接种针烧灼灭菌，取菌；2、培养管去塞；3、接种针从培养基表面中央垂直插入，离管底1-2cm；4、接种针原路返回；5、塞上塞子，标记，37℃培养24h。结果•生长现象–仅沿穿

3、刺线生长（动力试验-）–向四周扩散（动力试验+）平板分区划线接种接种混合菌液（金、大），一块平板/每人斜面、液体接种（金、大）中任一种，2人一套半固体接种（大肠或痢疾），2人一套实验安排平板分区划线(金大混合菌)每人一个斜面接种（金/大）两人一支液体接种（金/大）两人一支半固体穿刺（大/痢）两人一支二、抗酸染色1.原理:分枝杆菌脂质(分枝菌酸)含量高,与石炭酸复红结合力牢固,能抵抗3%盐酸酒精的脱色呈红色，为抗酸菌。非抗酸菌易被脱色,被碱性美兰染成蓝色.2.材料:抗酸染液和含BCG（卡介苗）的痰液。3.步骤:(1)制片:取痰液（3－4

4、环）,涂片,固定。(2)染色:A.滴加石炭酸复红,维持5min(加热),冷却，水流冲洗。B.滴加3%盐酸酒精，脱色30s，水流冲洗。C.滴加碱性美兰，染色1min，水流冲洗,吸水纸吸干,油镜检查4.实验结果蓝色背景（细胞、非抗酸菌）中红色分支状杆菌。5.结论：抗酸阳性（红色），抗酸染色阴性（蓝色）