草莓果实特异性启动子的克隆与功能分析

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1、山东大学硕士学位论文符号说明bpBasepair，碱基对LBLufia．bertanimedium，LB培养基CaMV35S35Spromoterofcaliflowermosoicvirus，花椰菜花叶病毒35S启动子UPEUpstreampromoterelement，上游启动子成分ToDNATransferDNA，转移DNAE．coliEscherichiacoli，大肠杆菌IPTGIsopropylthio—B-D—galactoside，异丙基⋯13D硫代半乳糖苷CTABCetyltrimethylammoniumb

2、romide，十六烷基三乙基溴化铵TrisTris—hydroxymethylaminomethane，三羟甲基氨基甲烷TE"Iris’CI，EDTAbuffer，嘣s‘C1、EDTA缓冲液PVPPolyvinyllpyrrolidone，聚乙烯吡咯烷酮PCRPolymerasechainreaction，聚合酶链式反应SDSSodiumdodecylsulfate，十二烷基硫酸钠EDTAEthylenediaminetetraaceticacid，乙二胺四乙酸ddH20Distilledanddeionizedwater，重

3、蒸水CarCarbenicillin，羧苄青霉素KanKanamycin，卡那霉素CefCettriaxonesodium，头孢曲松钠RifRifampicin，利福平MSMurashigeandSkllgmedium，MS培养基X-gal5-Bromo一4一chloro一3-indolyl—S-D—galactoside，5．溴．4．氯．3．吲哚．13．D-半乳糖苷GUSGhcuronidase，13．葡糖苷酸酶4-MU4一methulumbelliferone，4．甲基伞形酮X—Glue5-bromo-4-chloro-3

4、一indolyl—B—D·ghcuronide，5．溴．4．氯．3．吲哚．13．D．葡糖苷酸4-MUG4-methylumbelliferyl-13一glucuronide，4一甲基伞形一13．葡糖苷酸BSABovineserumalbumin，牛血清蛋白、6原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文

5、作者签名：壶里。乏Et期：麴&：垒：2，6关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：盆皂之导师签名：餐堕蜂日期：塑丝：金12占山东大学硕士学位论文草莓果实特异性启动子的克隆与功能分析摘要组成型启动子是植物基因工程中广泛应用的启动子类型之一，

6、可启动外源基因在受体植物中非特异性的持续、稳定的表达，但不能从时间和空间上对外源基因的表达进行有效的调控，这可能会造成植物在能源利用上的浪费，甚至会对转基因植物造成伤害。组织特异型启动子可以启动外源基因在受体植物的特定组织器官中高效表达，果实特异性启动子作为重要的组织特异性启动子，可以控制外源基因在转基因植物的果实中特异表达。克隆和研究果实特异性启动子，可为改良果实品质奠定基础。从Genbank中筛选了一个由差减文库筛选得到的草莓基因组EST序列(Accessionnumber：DY633382)，将推测对应的基因简称DY基因

7、。对此EST序列进行同源性分析，发现它与葡萄中的一个与果实成熟相关的丝氨酸／苏氨酸激酶基因有很高的相似性(83％)。进而，对草莓(Fragariaananassa，Duch．，CVChandler)中DY基因的表达模式进行RT-PCR分析，结果显示DY基因在果实中特异表达，且在不同发育时期表达量存在差异。在绿色果实期转录水平最高，在白色果实期转录水平最低，在转变期和红色果实期转录水平较白色果实期有所升高，但比绿色果实期稍低。RT-PCR结果表明DY基因是果实表达特异性的基因。根据EST：DY633382序列设计特异引物，利用T

8、AIL-PCR克隆得到了DY基因的起始密码子上游的1021bp启动子序列。利用在线生物信息学软件NSITE和PLACE分析该序列，结果表明DY基因启动子区TATA-box位于起始位点上游的．32～27区段，该序列包含有18个可能的顺式作用元件，如CC(汀CGmotif．GA—