玉米光周期敏感基因ZmELF4的克隆及功能验证

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1、1．3．5抑制因子⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．4水稻光周期作用分子机制的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．102．玉米光周期敏感现象的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112．1玉米光周期敏感现象⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．n2．2玉米光周期敏感指标及特性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．112．3玉米光周期敏感时期的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．122．4玉米光周期敏感相关基因的定位研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．122．5玉米光周期敏感相关基因的克隆与研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯133．拟南芥ELF4基因及其在其它物种中同源基因的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯143．1拟南芥ELF4基因的研

2、究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯143．2ELF4-like基因在其它物种中同源基因的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．154．同源序列克隆法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．154．1基因同源序列克隆法的原理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．154．2同源序列克隆法的优点及存在的问题⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．165．实时荧光定量PCR技术⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．175．1实时荧光定量PCR技术原理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．175．2实时荧光定量PCR技术的优点⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．186．亚细胞定位技术⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．186．1免疫荧光技术⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．196．2免疫胶体金标记⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．196。3融合报告基因定位法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．197．拟南芥转基因方法的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20第二章玉米光周期敏感基因ZmELF4的克隆⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．221．材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯221．1实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．221．2试剂与仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯231．3方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯231．3．1总RNA的提取与纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．231．3．2DNA的提取与纯化⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯241．3．3cDNA第一链的合成⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．251．3．4玉米ZmELF4基因片段的克隆⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯261．3．4．1玉米ZmELF4基因的PCR扩增⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯261．3．4．2玉米ZmELF4基因PCR扩增产物的回收、连接与转化⋯⋯．261．3．5测序结果分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．272．结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯272．1RNA提取、纯化、第一链合成及检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．272．2玉米ZmELF4基因的克隆与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．282．2．1玉米ZmELF4基因的克隆⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．282．2．2玉米ZmELF4基因序列分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．’．282．2．2．1CML288和黄早4中ZmELF4基因eDNA、DNA和氨基酸序列的比较分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．282．2．2．2ZmELF4基因的序列分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．302．2．2．3玉米ZmELF4基因的氨基酸序列分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯322．2．2．4玉米ZmELF4基因的两种转录方式⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．333．讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯343．1玉米ZmELF4基因是应心仇酲腭基因的同源基因⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯343．2玉米ZmELF4基因下一步亟待需要探

6、讨的问题⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．35第三章玉米ZmELF4基因及其相关基因的表达分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．361．材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯361．1供试材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．361．2光周期处理与取样⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．371．3试剂与仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯371．4方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．371．4．1总RNA的提取与纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．371．4．2cDNA第一链的合成⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．371．4．3荧光定量PCR引物的设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯371．4．4标准品

7、的制备和标准曲线的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯381．4．5样品检测与数据处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．382．结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯382．1基因标准曲线的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．382．2基因表达模式的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．392．2．1ZmELF4基因的节律表达模式⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯392．2．2ZmELF4基因不同生长发育阶段在叶片与茎尖中的表达