基于均相免疫技术的真菌毒素检测研究

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1、基于均相免疫技术的真菌毒素检测研究StudyoftheMycotoxinDetectionBasedonHomogeneousImmunoassayTechnology工程领域：仪器仪表工程研究生：吴震指导教师：徐可欣教授天津大学精密仪器与光电子工程学院二零一七年十一月摘要真菌毒素是由真菌产生的次级代谢物，在农产品的生产、加工、运输及储藏过程中产生风险较高。大部分真菌毒素具有致癌、致畸和致突变毒性，严重威胁到人体健康，对社会经济危害较大。因此，开发一种高灵敏度、方便、快速的真菌毒素检测方法，具有十分重要的研究意义和应用价值。目前，对于真菌毒素的检测，常用的方法有薄层层析法（TLC）、高效液相

2、色谱（HPLC）、气相色谱（GC）、质谱分析（MS）、酶联免疫吸附法（ELISA）等。TLC法样品前处理过程繁琐，HPLC法所需检测试剂和仪器设备昂贵，GC法检测仪器使用成本高、检测时间长；MS法往往需要与HPLC法或者GC法联用，检测过程复杂，ELISA法操作复杂，定量分析能力差，这些缺点也制约了其在真菌毒素现场快速检测中的应用。光激化学发光均相免疫检测法不仅灵敏度高，而且实现了一步、免清洗检测，操作过程简单，稳定性好，很容易实现小型化和自动化检测。本文针对真菌毒素现场快速检测需要，研究了基于光激化学发光均相免疫分析技术的真菌毒素检测方法。首先，研究了该方法的检测原理，根据其测量原理构建了

3、自制高通量均相免疫分析系统。其次，研究了两种危害性较大的常见毒素，黄曲霉毒素B1与呕吐毒素的检测方法，采用竞争法，通过待测样品与生物素化完全抗原竞争性的与单克隆抗体结合来实现定量检测。然后，分别根据免疫反应与均相检测步骤，研究了黄曲霉毒素B1和呕吐毒素的最佳检测条件。最后，优化结果，建立了适用于不同生物毒素检测的检测方法与标准曲线，实验结果表明，该方法可分别实现黄曲霉毒素B1的最低检测限为0.048ng/mL，最低定量限为0.22ng/mL，批内与批间变异系数均小于10%，植物油样品中AFB1的加标回收率在87%~105%之间；呕吐毒素的最低检测限为0.069ng/mL，最低定量限为0.91

4、ng/mL，批内与批间变异系数均小于11%，植物油样品中DON的加标回收率在87.8%~106.0%之间。综上所述，光激化学发光均相免疫检测技术可满足农产品中真菌毒素的快速便捷和高通量的检测需求，在真菌毒素现场快速检测领域具有广阔的应用前景。关键词：光激化学发光；均相免疫检测；黄曲霉毒素B1；呕吐毒素IABSTRACTMycotoxinsaresecondarymetabolitesproducedbyfungi，whicharelikelytoemergeinthegrowth,store,transportationandprocessingofagriculturalproducts.

5、Mostofthemycotoxinshavecarcinogenic,teratogenicandmutagenictoxicities,whichseriouslyendangerthehealthofhumansandcausegreatharmtothesocio-economic.Therefore,thedevelopmentofahighlysensitive,convenientandrapidmethodofdetectionofmycotoxinshasveryimportantresearchsignificanceandapplicationvalue.Atprese

6、nt,thedetectionmethodsofmycotoxinsmainlyincludethinlayerchromatography(TLC),highperformanceliquidchromatography(HPLC),gaschromatography(GC),massspectrometry(MS),enzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA).ThedrawbacksoftheTLCarethatthesamplepreparationprocessiscumbersome;thedisadvantagesoftheHPLCmethoda

7、rethatthereagentsandinstrumentsrequiredareexpensive;theGCmethodhasthedisadvantagesofhighcostoftestingequipment;theMSmethodoftenneedstobecombinedwithHPLCorGCmethod,andthedetectionprocessiscomplex;theELISAmet