反义Snail抑制卵巢癌转移作用机理的研究

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1、反义Snail抑制卵巢癌转移作用机理的研究复旦大学博士论文中文摘要卵巢癌是女性生殖器三大恶性肿瘤之一，患者多因发生转移而死亡。但是有关卵巢癌转移的发病机制了解尚少。Snail是一种锌指蛋白转录因子，参与早期胚胎发育过程中原肠胚和神经嵴的形成。近年来的研究发现，它在上皮来源肿瘤的侵袭、转移过程中具有重要的调控作用，主要涉及肝癌、乳腺癌等，但在卵巢癌中这方面研究尚少。本研究分体外和体内两部分，分别观察抑制Snail表达对卵巢癌转移的影响。体内实验采用RT—PCR和免疫印迹的方法对卵巢癌细胞株中Snail

2、与E一钙粘蛋白表达进行相关性分析；脂质体转染反义Snail质粒，观察Snaii表达受抑后对E一钙粘蛋白表达及卵巢癌细胞体外运动和侵袭功能的影响；同时了解抑制Snail对卵巢癌细胞基质金属蛋白酶转录水平表达及酶活性的影响。体外实验，建立裸鼠卵巢癌原位移植模型，观察Snail表达受抑后卵巢原位移植瘤生长及转移的情况；检测Snail和E一钙粘蛋白及基质金属蛋白酶在转移部位的表达情况，初步探讨卵巢癌转移发生的机制。第一部分反义Snail对卵巢癌细胞体外侵袭和转移的影响一、反义SnaiI抑制卵巢癌转移与E_钙

3、粘蛋白相关性研究目的：了解卵巢癌细胞中Snail和E一钙粘蛋白的表达和分布，探讨反义Snail质粒转染对卵巢癌细胞运动和侵袭的影响。方法：逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测4种卵巢癌细胞株H08910、H089]OPM、NIH：OVCAR3、ES一2中Snail与E一钙粘蛋白mRNA的表达：蛋白印迹方法检测4株卵巢癌上皮细胞中E一钙粘蛋白的表达。将H08910细胞分为两组，分别转染反义Snail质粒(反义组)和空载体质粒(对照组)，观察Snail对E一钙黏蛋白mRNA表达的逆转作用，及对卵巢癌细

4、胞体外侵袭、运动的抑制作用。结果：SnailmRNA在卵巢癌细胞株H08910、H08910PM、ES-2中表达，而E一钙粘蛋白的mRNA和蛋白仅NIH：OVCAR3中表达；H08910细胞株瞬时转染反义Snail质粒后，Snail0、24、48h表达量分别为0．897士0．005、0．865士0．Ol、0．338士0．014，表达降低。0h与24h相比差异显著，(P

5、达量分别为0、0．130土0．001、0．217士0．005，各时间点反义Snail抑制卵巢癌转移作用机理的研究复旦大学博士论文中文摘要比较均有显著差异(P

6、表达量为0．191士0．01，显著低于对照组的0．582±o．Ol(P

7、个／商倍镜(×200)，两组间差异显著(P(O．05)。结论：卵巢癌中存在Snail与E一钙粘蛋白逆转表达的关系，抑制Snail的表达对卵巢癌细胞的侵袭和运动具有的抑制作用，可能为卵巢癌转移的基因治疗提供新的有效的靶点。二、反义Sna；I抑制卵巢癌体外侵袭与基质金属蛋白酶家族成员的相关性研究目的：了解稳定转染反义Snai1质粒的卵巢癌细胞在抗E一钙粘蛋白抗体封闭E一钙粘蛋白黏附功能后，卵巢癌细胞体外运动和侵袭能力的改变；检测稳定转染反义Snail质粒后基质金属蛋白酶表达的变化；初步筛查Snail表达

8、受抑对卵巢癌转移相关基因表达调控的影响。方法：采用Transwell体外运动试验和Matrigel体外侵袭实验，稳定转染的卵巢癌细胞分为未用药组、IgG对照组、抗E-钙粘蛋白组，Transwell体外运动试验中，IgG和抗E一钙粘蛋白抗体分别采用4个剂量Oug／ml、5ug／m1、7．5ug／ml、lOug／ml检测不同浓度抗体作用下，稳定转染反义Snail的卵巢癌细胞体外运动能力的变化。Matrigel体外侵袭试验，IgG和抗E一钙粘蛋白抗体浓度分别为Oug／ml和