土壤细菌抑制绿僵菌作用机理的初步研究

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1、分类号S763.3密级公开UDC582.28学位论文土壤细菌抑制绿僵菌作用机理的初步研究APreliminaryStudyofInhibitionMechanismofSoilBacteriaagainstMetarhizium吴小双指导教师姓名王浩杰研究员申请学位级别农学硕士专业名称森林保护学研究方向森林有害生物综合治理论文提交日期2015年5月论文答辩日期2015年6月学位授予日期2015年7月答辩委员会主席评阅人北京·中国林业科学研究院学位论文土壤细菌抑制绿僵菌作用机理的初步研究学位论文作者吴小双指导教师姓名王浩杰研究员指导教师姓名张亚波助理研究员申请学位级别农学硕士专业

2、名称森林保护学研究方向森林有害生物综合治理论文答辩日期2015年6月中国·北京独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研巧成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得本研究生培养单位或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料一同工作的同志对本研究所。与我做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名；日期设年《月三去日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解中国林业科学研究院有关保留、使用学位论文的规定，中国林业科学研

3、究院有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权中国林业科学研巧院可■将学位论文（、的全部或部分内容编入有关数据库进行检索＞？缩印或扫描等复制，可１＾采用影印手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：年月之安日王。／５年月＞２５日学位论文作者毕业联系方式工作单位：联系电话：电子邮件：通讯地址、邮编：DissertationfortheDegreeAPreliminaryStudyofInhibitionMechanismofSoilBact

4、eriaagainstMetarhiziumCandidate:WuXiaoshuangSupervisor:Prof.WangHao-jieAssociateSupervisor:AssistantProf.ZhangYa-boAcademicDegreeAppliedfor:MasterSpeciality:ForestProtectionDateofDefence:June2015Degree-conferring-institution:ChineseAcademyofForestry摘要绿僵菌（Metarhiziumspp.）是一种分布广泛、寄主多样的昆虫病原真菌，在

5、农林害虫微生物防治中扮演着重要的角色，平沙绿僵菌（Metarhiziumpingshaense）wp08菌株对竹林优势种筛胸梳爪叩甲（Melanotuscribricollis）幼虫（即金针虫）具有较高毒力，但田间防治效果不佳，土壤的抑真菌作用是影响该菌防效的主要原因之一。为探究土壤对绿僵菌的抑制作用，本文测定了土壤对绿僵菌wp08菌株的抑制效果，并从土壤中分离出对绿僵菌wp08菌株有抑制作用的不动杆菌，利用SPME-GC/MS法分析鉴定其挥发物中具有抑菌活性的化合物，确定了不动杆菌的代谢产物及挥发物是其抑制绿僵菌萌发的主要因素。并利用高通量测序技术，分析了绿僵菌与土壤细菌群落

6、变化的关系，为研究土壤对绿僵菌的抑制作用及改善绿僵菌田间防效提供一定的基础信息。研究主要内容及结果如下：1.分别在培养16h、24h、36h、48h后，测定土壤对绿僵菌wp08菌株孢子萌发的影响，经统计各个时段绿僵菌wp08菌株孢子在非灭菌土与灭菌土中的萌发率均表现出显著性差异（P＜0.05）。从分离自土壤的54株细菌中筛选出了8株对绿僵菌wp08菌株孢子萌发率有显著抑制作用的菌株。经鉴定8株细菌均属于不动杆菌（Acinetobacter），受其挥发物抑制，绿僵菌wp08菌株孢子在培养48h时，萌发率不足30%，对照萌发率为96.4%。在含有细菌发酵液的培养基上，萌发率随发酵液

7、浓度的增加而下降，在培养96h后，最低萌发率仅为6%。其挥发物对绿僵菌wp08菌株菌丝生长无明显影响，发酵液对菌丝有抑制作用，两者对产孢量影响差异不显著。将发酵液加到土壤中后，绿僵菌wp08菌株对筛胸梳爪叩甲幼虫毒力下降，LT50从12.7d上升到20.9d。2.通过GC-MS分析，从不动杆菌发酵液的挥发物中共鉴定出21种化合物，主要包括芳香族化合物（76.4%）、烷烃类（7.32%）、烯烃类（3.06%）、酮类（6.1%）、醌类（1.69%）。其中二丁基羟基甲苯、莰酮、苯并噻唑、苯胺等可能