中国绿僵菌分子分类的研究

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1、分类号：１０３６４：邮３单位代码密级：化学号：１２７２０４０２耳签化义ｆ硕±学位论文中国绿僵菌分子分类的研究ＲｅｓｅａｒｃｈｏｎｍｏｌｅｃｕｌａｒｔａｘｏｎｏｍｙｏｆＭｅｔａｒｈｉｚｉｕｍｌｉｎｅａｅｉｎｇＣｈｉｎａ研巧生：章西指导教师：常勃合作指导教师：申请学位口类级别：理学硕±专业名称；微生物学研巧方向：微生物分子生物学所在学院；生命科学学院ｆ＾答辩委员会主席：呼二零一五年五月独创性声明

2、本人声明所呈的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加Ｗ标桂和致谢的地方夕ｈ论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名；觀考签字日期；ＷＴ年ｒ月３日学位论文版权使巧授权书本学位论文作者完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部ｎ或机构送父论文的复

3、印件和电子文件，允许论文被查阅和借阅。本人授权安徽农业大学可将学位论文的全部或部分内容进，《国位论编入有关数据库行检索收录到中学影、、汇，可＾印缩扫描等复制手段保存编文全文数据库》＾＾采用印或，公众息服务。（保密的学论文在解密后适学位论文向社会提供信位）。用本授权书签：＾签；作者名指导教师名学位论文＾－＇＊？Ｗ／化巧ＡＳ签子；Ｌ签千：月讀）日日期２年月日日期年论去：文作者毕业后向学位工：：电话作单位通地址：；信邮编摘要自1873年Metchnkov首次使用金龟子

4、绿僵菌(Metarhiziumanisopliae)成功防治奥地利金龟(Anisopliaaustriaca)后，绿僵菌作为真菌杀虫剂被广泛研究。随后在1883年Sorokin以金龟子绿僵菌为模式种建立绿僵菌属Metarhizium，绿僵菌的研究步入以形态特征为主要分类依据的时期。随着分子技术和基因工程的发展，分子数据便被广泛用于系统发育研究。尤其是PCR技术的出现及DNA测序技术的不断完善，使得系统发育分析成为可能。近年来系统发育分析的方法日益完善，多基因系统发育关系分析也被广泛应用于反映物种的进化历史。本文主要研究了

5、中国绿僵菌的分类情况。首先将采集的僵虫用僵虫分离法分离绿僵菌，即用细针从僵虫上挑取绿色孢子于SDAY培养基上划线培养筛选绿僵菌。对采集的土壤用多果定选择性培养基筛选绿僵菌。待这两种培养基上的菌落产孢后，分别观察菌落形态，即菌丝和孢子的颜色，并在光学显微镜下观察孢子形态大小，待初步鉴定为绿僵菌后，将目标菌株转移至SDAY培养基上纯化。结合安徽农业大学微生物防治重点实验室菌种库(RCEF)中的绿僵菌种源，对其进行活化培养。通过分子学方法和形态学方法对得到的共134株绿僵菌菌株进行鉴定。[1]根据Kepler&Rehner的研

6、究表明，MzIGS3基因能够有效鉴定金龟子绿僵菌复合种。为了验证MzIGS3基因对金龟子绿僵菌复合种的鉴定效果，实验通过MzIGS3基因对134株绿僵菌进行初步鉴定，结合EF-1a基因对其他绿僵菌进行补充性初步鉴定，再通过三基因测序对MzIGS3基因和EF-1a基因初步鉴定中的模糊种进一步鉴定。1、实验通过MzIGS3基因对134株绿僵菌进行初步鉴定。通过MzIGS3基因扩增，最终得到100株菌株的序列。根据这100株菌株序列构建的单基因系统发育树，可将这100株绿僵菌划分为CladeI~CladeVIII共8个大分支。

7、依据MzIGS3系统发育树可知，分支A、B、C构成CladeI。分支C鉴定为平沙绿僵菌Metarhiziumpingshaense，分支A、B中的菌株为模糊种。CladeII鉴定为洛泊斯绿僵菌Metarhiziumrobertsii。CladeIII鉴定为金龟子绿僵菌Metarhiziumanisopliae。CladeIV可能为棕色绿僵菌Metarhiziumbrunneum。CladeV由分支G、H、I组成，分支中的菌株均为模糊种，需进一步鉴定。CladeVI鉴定为大孢绿僵菌Metarhiziummajus。Clad

8、eVII鉴定为鳞腮绿僵菌Metarhiziumlepidiotae。CladeVIII鉴定为蚱蜢绿僵菌Metarhiziumacridum。2、EF-1a基因初步鉴定中10株鉴定为金龟子绿僵菌复合种中的菌株，4株鉴定为柱孢绿僵菌Metarhiziumcylindrospora，13株鉴定为瘿绵蚜绿僵菌Metarhiz