感染萧氏松茎象绿僵菌菌株筛选及其致病机理研究

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1、福建农林大学博士学位论文摘要萧氏松茎象是一种危险性的松树新害虫，其危害已成为林业生产的重要问题，而绿僵菌是生物防治的主要病原真菌之一，本论文筛选出了对萧氏松茎象致病力较强的绿僵菌Mal291．2和MaWP．01菌株，系统研究了其生物学特性、致病机理及萧氏松茎象对绿僵菌侵染的体液免疫反应，并开展了林间生物防治试验，为该害虫的生物防治奠定理论和应用基础。1．应用10株绿僵菌菌株分别对萧氏松茎象幼虫进行致病力测定，结果表明，以浓度为(1．5-4-0．5)×106孢子·mL。1的孢子悬液喷菌，7d后校正死亡率最高为91．90％，最低为15．

2、28％，僵虫率最高为91．32％，最低为24．80％，￡乃。为5．39．10．12d，单头虫体平均产孢量为106．107孢子·头～。其中，Mal291．2、MaWP．01和Mal775菌株对萧氏松茎象幼虫致病力较强，僵虫率分别为89．56％，91．32％和88．12％，L／'50分别为5．49d，5．72d和5．53d，且都具有较高的僵虫虫体含孢量。通过时间一剂量一死亡率模型参数估计发现，绿僵菌Mal291．2和MaWP．01菌株对萧氏松茎象幼虫的致死效应较强的时间分别在第8d和第9d，处理的孢子浓度越高，其死亡高峰期越早。2．利用

3、12株金龟子绿僵菌菌株分别对萧氏松茎象成虫进行致病力测定，并选择致病力较强的菌株进行林间感染试验，结果表明：Mal291．2菌株对萧氏松茎象的致病力最强，其次是MaWP．01菌株。以浓度(1．5+0．5)x108孢子·mL‘1接菌，30d后，Mal291．2菌株处理其校正死亡率、僵虫率和僵虫虫体含孢量分别为70．59％、70．81％和(1．90a：0．34)×105孢子·头一，致死速度最快，上死。为13．89d；MaWP．01菌株处理其校正死亡率和僵虫率分别为70．02％和69．79％，￡乃。为15．98d。通过时间一剂量一死亡率模

4、型参数估计发现，绿僵菌Mal291．2菌株对萧氏松茎象成虫的致死效应较强的时间在16．18d，处理的孢子浓度越高，其死亡高峰期越早。两菌株林间感染试验，萧氏松茎象校正死亡率分别为(57．85-4-1．19)％和(44．35+2．91)％。可见，Mal291．2和MaWP．01菌株对萧氏松茎象幼虫和成虫均有较强的致病力，有较大的开发利用价值。3．5种常用培养基中，Mal291．2和MaWP．01菌株在PPDA培养基上的生长最快、产孢量最高。以葡萄糖为碳源，蛋白胨或酵母浸膏为氮源两菌株的产孢量较高：Mal291．2菌株孢子萌发最适宜的碳

5、源是葡萄糖，MaWP，01菌株孢子萌发最适宜的碳源是葡萄糖和可溶性淀粉。两菌株的孢子萌发较好的氮源是蛋白胨和牛肉膏。在温度25℃．28℃范围内，两菌株产孢和孢子萌发率都最好。在相对湿度90％以上，两菌株的孢子都有较高的萌发率。光照对两株菌株的产孢和萌发都较大的抑制作用。4．利用扫描电镜对绿僵菌Mal291．2菌株侵染萧氏松茎象成虫的部位和侵过程进行研究，结果表明，该虫主要侵染的主要部位是腹部。接菌后第2d，孢子已开始萌发，第3d，成功附着的孢子定向生长产生芽管，有的芽管末端膨大，侵染过程中未发现有附着福建农林大学博士学位论文胞产生；

6、第4．5d，孢予定向生长的同时产生菌丝；接菌后第8d，刚死亡的虫体体表出现新的菌丝及分生孢子；接菌后第9．10d，未保湿培养的致虫体布满菌丝，并产生大量分生孢子，为再侵染提供了条件。5．探讨萧氏松茎象成虫血淋巴细胞对绿僵菌Mal291．2菌株侵染的免疫反应，结果表明：绿僵菌的侵染诱导了其血细胞的浓度和行为的强烈免疫反应。在侵染过程中，萧氏松茎象的血淋巴细胞出现数量增多、聚集形成结节、包囊和吞食等现象，最后血细胞黑化并受破坏而裂解。接菌后5．8d，总血细胞浓度发生先升高后下降的强烈波动变化，第7d达到最高峰，其浓度为(4．71+0．0

7、2)x104细胞·uL一。萧氏松茎象成虫的正常血淋巴中，浆血细胞、粒血细胞、珠血细胞、类绛血细胞和原血细胞分别占总血细胞的数量比例为(34．46-4-0．16)％、(17．28-4-0．16)％、(8．54-4-0．40)％、(5．01+0．32)％和(4．90-J：O．05)％，但浆血细胞、粒血细胞和珠血细胞浓度都在接菌后6．10d发生急速上升后下降的波动变化，而原血细胞浓度在接菌后第6d极显著下降，类绛血细胞浓度波动变化较小。6．萧氏松茎象幼虫和成虫血细胞裂解液中酚氧化酶活性都极显著高于血浆，分别是血浆中的2．04和1。91倍：

8、幼虫血细胞裂解液中酚氧化酶活性最高，是成虫的1．52倍。经不同致病力菌株的菌丝裂解液激活后，幼虫和成虫血淋巴中的酚氧化酶活性都明显增强，但随着菌株致病力的增强，其对酚氧化酶原的激活作用减弱。无致病力Ma20菌株的菌丝裂解液激活后，其酚