不同一性双胎胎盘IGFⅡ基因印迹、启动子调控及蛋白表达的研究

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1、◇不一洼双胎删GH⋯憾启动相控及釉表遮的研究一要不同一性双胎胎盘IGF．II基因印迹、启动子调控及蛋白表达的研究博士研究生：罗艳敏导专师：庄广伦教授方群教授业：妇产科学中【LI大学附属第一医院妇产科胎儿医学中心摘要双胎不同一性是多胎妊娠特有的并发症，指双胎在生长发育、基因型和表型中的不一致，狭义上单指双胎间体重差别大于20％。刁i同一性双胎较发育一致双胎预后更差，围生期死亡、先天畸形、严重的颅内出血、大脑发育不良、新生儿窒息以及呼吸窘迫等并发症明显升高。研究双胎不同一性的原因，对针对性地监测和处理多胎妊娠、改善Jlfi')l,预后有重要意义。引起双胎不同一性的因素较多，基因组印迹的

2、改变可能是其中较为重要的原因之一。基因组印迹是近年发现的一种不遵从孟德尔定律、依靠单亲传递的遗传学现象。印迹基因通过亲缘特异性的表遗传修饰，使一对等位基因呈单等位基因表达或差异表达——即基因的表达取决于该基因源白父亲或母亲。如果特异性亲源优先表达基因缺失，包括正常沉默等位基因异常表达，从而导致双等位基因表达，或使正常表达的等位基因沉默，从而导致后天基因位点沉默，称为印迹丢失。印迹基因对胚胎形成、胎儿生长、胎盘分化及出生后生长发育、行为等起着关键作用，这些基因印迹状态的改变与发育异常、某些遗传病和肿瘤发生有关。胰岛素样生长因子II(insulin—likegrowthfactorII

3、，IGF—II)是胎儿发育和胎盘形成的重要印迹基因，由4个启动子P1、P2、P3、P4调控，父源性表达。IGF—II的基因印迹特性是发育阶段、组织及启动子特异性的，这使得TGF—TT的表达及调控十分复杂，尚存在很多不解之谜。胎盘中的IGF—II通过调节胎盘的形成、生长、对营养的利用和转运，影响胎儿的生长发育。IGF—II基因印迹丢失可引起胎儿发育异常：该基因启动子突变可导致胎儿生长受限。有关双胎妊娠IGF-II改变的研究较少。关于双胎胎盘IGFII的基因印迹表达及启动子调控，尚未见报道。胎盘IGF—II的表达及调控是否在双合子和单合予双胎中有所不同?双胎不同一性是否与胎盘IGF—I

4、I的基因印迹改变有关?绒毛膜类型、合子性质和辅助生殖技术是否与基因组印迹的改变有关?这些问题均有待研究。本课题的研究目的是：1．通过检测单胎和双胎胎盘IGF—II基因印迹状态，了解IGFII基因印迹状态与胎儿发育和双胎不同一性的关系，以及单合子和双合子双胎、辅助生殖与自然受孕双胎之间IGF—II基因印迹状态的差异。2．通过检测胎盘IGF—II基因启动子表达活性，探讨双胎IGF—Ii基因启动子表达与其基因印迹状态的关系。3．通过检测胎盘组织中IGF—II蛋白表达，了解其在孕晚期不同孕周胎盘细胞中的水平，比较单胎与双胎、不同一性双胎与正常双胎之间IGF—II蛋白表达水平的差异。第1章不

5、同一性双胎胎盘IGF—II基因印迹状态本研究收集妊娠中晚期双胎病例80对，同期分娩的正常单胎42例，其中正常双胎(TO组)55对(68．75％)，体重不同一性双胎(T1组)即双胎间体重差别>20％者17对(21．25％)，表型不同一性双胎(T2组)8对(10．00％)。采用逆转录结合聚合酶链反应技术和ApaI限制性内切酶片段长度多态性检测胎盘不同一性矾脑胎盘fGF—if基因印迹、启动子调控及蛋白表这的研究中文摘要IGF—II基因印迹状态。实验结果：(1)正常双胎胎盘IGF—II基因印迹丢失率为17．6％，较单胎(8．7％)升高，但无显著性差异(尸>0．05)。(2)胎盘IGF—II

6、基因印迹丢失率在表型不同一性双胎(T2组)为50．0％，较T0组(17．6％)和T1组(15．8％)明显升高(P<0．05)。(3)以双胎特异的出生体重参考值为诊断标准，双胎大于胎龄儿I(；F—II基因印迹丢失的发生率为36．8％，明显高于适于胎龄儿(13．8％，72<0．05)。体重不同一性双胎(TI组)2例发生基因印迹丢失的均为大于胎龄儿。(4)辅助生殖和自然受孕双胎(17．9％：24．4％)、双绒毛膜和单绒毛膜双胎(23．3％：12．5％)、双合子和单合子双胎(22．4％：16．7％)之间胎盘IGF-II基因日J迹丢失率无显著性差异(户>0．05)。(5)女性双胎胎盘IGF—

7、II基因印迹丢失率为26．4％，较男性(9．8％)明显升高(P