ARF基因导入烟草的遗传转化研究

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1、硕十论文ARF罄闲导入烟挚的遗传转化研究摘要生长素影响植物生长发育的每个阶段。生长素早期或原初的反应基因的启动子通常包括最小的生长素反应元件TGTCTC序列。生长素反应因子(ARF)与这类生长素反应元件特异性地结合后调节着生长素反应基因的表达。已有报道说ARF基因的表达都不受生长索浓度的影响。本实验试图将ARF基因引入烟草植株，使转基因烟草成为该基因表达蛋白的生物反应器。本研究以烟草无菌苗叶片为外植体，利用叶盘法，通过含生长素应答基因的根癌农杆菌LBA4404携带双元质粒载体(pBin438)介导进行

2、转化，开展ARF基因转化烟草的研究。其主要结果如下：1．烟草高频再生体系的建立采用无菌苗烟草叶片为外植体，以MS为基本培养基，筛选出MS+0．8mg／L6-BA4-0．05tng／LN^A以诱导不定芽的分化，并于l／2MS+O．02mg／LIBA+O．02mg／LNAA的生根培养基上生根，获得完整再生植株。其叶片分化率达96．9％，生根率达96．7％。2．转化体筛选及植株再生将预培养3d的外植体与农杆菌菌液浸染3-Smin后，共培养2—3d，然后转化到含Km75mg／L的选择培养基上进行分化筛选，再转

3、入Km为75mg／L，100mg／L的培养基上进行生根筛选，生根率为66．1％。与对照相比转基因烟草在形态上发生了明显的改变：叶片颜色变深绿；叶片增厚；主叶脉变粗壮等。3．转基因PCR检测PCR扩增，获得40株阳性转基因苗，证明ARF基因己导入烟草中，转化率为32．8％。关键词：ARF基因；转基因烟草；根癌农杆菌；遗传转化硕十论文ARF幕嘲导入烟草的遗传转化研究ABSTRACTAuxineffectsa“thegrowthdevelopmentperiodsofplants．Thepromoterso

4、fauxinearlyorprimitivereactiongenegenerallyincludetheminimalauxinreactionelementsequence(TGTCTC)．Auxinresponsivefactor(ARF)combineswiththiskindofauxinreactionelementsuniquelyandcontroltheexpressionofauxinreactiongene．IthasbeenreportedthatARFgeneexpressi

5、onwagnoteffectedbyauxinconcentration．Weexpectthatthetransgenictobaccoplantbecomeabioreaetoranddevelopanewwaytoproduceauxinprotein．Inthispaper，tobaccoasepticseedlingleafwereusedasexplants，andthegenewastransferredintotobaccobyAgrobacteriumLBA4404mediation

6、whichhasbeeninsertedwiththeplantexpressionvectorpBin438thatcontainARFpromoterandlaidafoundationforscaleproductionofARFfromtransgenicplant，Themainresultsareasfollows：1．Regenerationsystemofplants．Theregenerationsystemoftobaccowasestablished．Theadventitiou

7、sshootswereinducedfromleafexplantsoftobaccobasedonMSbasalmediumsupplementedwithO．8mg／L6-BAandO．05mg／LNAA．ThentheregeneratedplantswererootedonI／2MSmediumcontaining0．02mg／LNAAandO．02mg／LIBA．Andthefrequencywasabout96．9％。96．7％respectively．2．Transformationan

8、dselectionofplants．Leafexplantshadbeenpre-culturedfor2days，thenimmersedinAgrobacteriumsuspensionfor5-6minutes．TheCO-cultivationhadbeencarriedoutfor2-3days．Afterthat，thetransformantswereobtainedbytransferringexplantstoselectionmed