本科毕业论文-荔枝LcWDR1基因对烟草的遗传转化研究

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1、本科毕业论文荔枝LcWDR1基因对烟草的遗传转化研究指导教师学院名称园艺学院专业名称种子科学与工程论文提交日期2012年5月21论文答辩日期2012年5月5日摘要19植物花色素苷的合成除了受结构基因的控制，还受到调控基因的影响，目前已鉴定出R2R3-MYB蛋白、bHLH蛋白和WD40蛋白三类参与花色素苷合成调控的转录因子。本实验以模式植物烟草为材料，以构建好的LcWDR1的植物表达载体，采用农杆菌介导法对烟草进行遗传转化，以期阐明LcWDR1基因的功能。经过一系列的筛选培养，得到56株抗性植株，PCR检测表明

2、，有40株扩增出的特异条带与阳性对照扩增出的特异条带一致，且均无农杆菌污染，而非转基因的烟草植株则没有特异条带出现，PCR检测结果初步表明外源基因已经整合进烟草植株的基因组中，得到PCR阳性植株。LcWDR1阳性植株与对照相比暂无明显的表型差异，结果还有待进一步的观察分析。关键词：LcWDR1基因遗传转化烟草TransformationAnalysisoftheLcWDR1GeneinTransgenicTobaccoChengLu19（CollegeofHorticulture,SouthChinaAgri

3、culturalUniversityGuangzhou510642,China）Abstract:Flowerpigmentssynthesisinplantwascontrolledbothstructuralgenesandregulationgene.Currenly,threekindsofflowerpigmentssynthesisi.e.R2R3-MYB,bHLHandWD40proteinhasidentified.Inthepresentstudy,tobaccowasusedasmater

4、ialstostudythefunctionofLcWDR1genedrivenbyCaMV35Spromoter.Afteraseriesofscreeningculture,56resistantplantletswereobtained.FortyputativeplantswereachievedaccordingtoPCRanalysis.ThePCRresultsshowedthattheLcWDR1geneshadbeensuccessfullytransferredintotobaccogen

5、omics.However,nodifferencewasdetectedbetweentransformedplantsandwildtypes.Keywords：LcWDR1GeneTobaccoGenetictransformation19目录1前言11.1研究综述11.1.1荔枝果皮花色素苷生物合成转录调控的研究11.1.2WD40调控花色素苷生物合成的研究11.1.3植物转基因方法概述21.2研究目的和意义22材料与方法22.1材料22.1.1转化材料22.1.2菌株和表达载体32.1.3主要试剂和

6、培养基配方32.2方法32.2.1农杆菌的培养32.2.2遗传转化32.2.3转化植株的PCR鉴定43结果与分析53.1导入烟草及候选转基因植株的获得53.2烟草转化体的PCR检测分析结果74讨论114.1实验原理114.2LcWDR1在烟草中的异源表达114.3假阳性问题的探讨11致谢12参考文献12本科专业毕业论文成绩评定表14191前言1.1研究综述1.1.1荔枝果皮花色素苷生物合成转录调控的研究色彩是决定花卉和果蔬品质的一个重要方面，而色彩又取决于花色素苷含量积累的表现。花色素苷除了能给蔬菜、花卉、水

7、果带来丰富鲜艳的颜色，还具有对生物和非生物的胁迫反应的响应，比如：紫外线照射、冷胁迫、干旱胁迫等反应（Ubietal,2006；Castellarinetal,2007；Zhangetal,2011）。最近国内外的研究表明，花色素苷合成代谢的调控是在转录水平上，主要通过调控花色素苷合成代谢过程中结构基因的表达，从而使合成代谢过程中的酶的合成受到影响（Allanetal,2008)。目前已鉴定了三类参与花青素合成调控的转录因子，分别是R2R3-MYB、bHLH和WD40。荔枝是我国南方重要的亚热带果树，种质资源

8、丰富，色泽类型多种多样，但目前对其果实色泽发育过程和着色机理的研究尚不够系统和深入。1.1.2WD40调控花色素苷生物合成的研究WD40重复蛋白是目前已鉴定的三类参与花青素合成调控的转录因子之一，WD40重复蛋白发现于植物细胞质。该序列以甘氨酸-组氨酸(Gly-His)开始，以色氨酸-天冬氨酸(Trp-Asp,WD)结尾，因此称为WD40基序，而含有此种基序的蛋白称作WD40蛋白（Smithetal