1株鸽新城疫病毒的分离、鉴定及生物学特性研究

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1、一8一养禽与禽病防治2012年第3期孔，从第10孔吸取25p~L弃去。稀释后每排第1～1l1．2．5动物回归试验及病理切片观察孔再加入251xL4HAU抗原，反应5～10min，最后加F6代病毒尿囊液经10稀释，通过滴鼻和肌肉入1％红细胞悬液25p~L，用微量振荡器混匀，室温注射的方式对30日龄左右的10只雏鸽进行攻毒，下静置30～40min。肌肉注射0．5mL／只。另设5只健康鸽作为空白对照。1．2-3病毒ELD的测定攻毒后观察每组鸽的发病和死亡情况，观察2周，并将分离的病毒尿囊液F6代用无菌生理盐水作对发病及死亡鸽做组织病理学观察。l0

2、倍系列稀释，取10～10【】5个稀释度分别经尿囊2结果腔途径接种5枚10日龄的SPF鸡胚，0．1m胚，置2．1病毒分离、鉴定结果37℃孵育96h，24h前死胚为非特异性死亡，废弃不2．1．1各代次鸡胚尿囊液HA效价计，记录24～96h内死亡鸡胚，按Reed—Mueneh法病料滤过液接种的10枚SPF胚中，有6枚于计算其ELD。24～72h内死亡，胚体充血、出血，逐胚测定各代次1．2．4毒力的测定鸡胚尿囊液HA效价，F1～F6各代尿囊液平均HA1．2．4．1脑内接种致病指数(ICPI)测定效价分别为2、2、2、2、2、2。。将分离的病毒尿囊液

3、F6代以灭菌生理盐水稀2．1-2血凝抑制(HJ)试验结果释10倍，脑内注射出壳后24～36h的SPF雏鸡10鸡胚尿囊液血凝性仅被NDV的标准阳性血清只，每只0．05mL，同时设5只对照(脑内注射灭菌生所抑制，而不被禽流感(H5、H7、H9亚型)及EDS76理盐水0．05mL)，隔离饲养，观察8d[21。记录正常、发标准阳性血清所抑制。病与死亡鸡的每日累计数，正常鸡积分为0、发病为2．2F6代病毒尿囊液病毒含量的测定结果1、死亡为2，最后计算ICPI，ICPI=(8d累计发病经测定，该分离株的ELD为10-~．6o／0．1mI。数Xl+8d累

4、计死亡数X2)／8d累计鸡只总数。2．3毒力的测定结果1．2．4．2静脉接种致病指数(IVPI)测定经测定，该分离株的ICPI为1．64，IVPI为2．2，将分离毒种F6代以灭菌生理盐水稀释10倍，MDT为44．1h。翅静脉接种42dSPF鸡10只，每只0．1mL，同时设52．4动物回归实验结果只对照(静脉注射灭菌生理盐水0．1mL)，隔离饲养，攻毒后4d，所有试验鸽精神沉郁，出现神经症观察10d。记录正常、发病、麻痹与死亡鸡的每日累状，表现头颈后仰(观星状)、歪头、扭颈及翅膀麻痹计数，正常鸡积分为0、发病为1、麻痹为2、死亡为等，肛门周围

5、粘满绿色粪便。剖检可见肌胃、腺胃出3，最后计算IVPIL21，IVPI=(10d累计发病数X1+10d血，肠黏膜出血，里面充满黄色黏液，脑部也见轻微累计麻痹数X2+l0d累计死亡数×3)／lOd累计鸡只血。组织病理学观察脑部脑膜充血瘀血，血管周同总数。间隙增宽，淋巴细胞浸润；脾脏瘀血，大量浆细胞聚1．2．4．3MDT测定焦；肝脏瘀血；肠道固有层大量浆细胞浸润；气管分将分离的病毒尿囊液F6代以灭菌生理盐水分泌旺盛，固有层瘀血，炎症细胞浸润(图1～5)。别稀释成l0～10，每个稀释度分别接种9日龄SPF3小结与讨论鸡胚10枚，每胚0．1mL，3

6、7~C继续孵化，弃去24h内3．1根据从发病鸽中分离到病毒具有血凝性，且能的死胚，以后每天照蛋3次，记录胚胎残废时间，取被抗NDV血清所抑制，而不被禽流感(H5、H7、H9尿囊液测定HA效价，持续7d，取全部致死鸡胚的亚型)及EDSV76标准阳性血清所抑制，以及动物回最大稀释度死胚的记录，计算MDT[21，MDT=(Xh×归试验结果及组织病理学检查结果可以判定鸽群感Xh死亡胚数+Yh×Yh死亡胚数)／死亡胚总数。染了新城疫病毒，病毒和以往报道1的关于鸽新城图1脑部病理组织变化A：脑膜：充血、瘀血H_E200XB：血管周围间隙增宽，淋巴细胞浸

7、润H_E200×一10一养禽与禽病防治2012年第3期摘要：通过鸡胚矮小试验、血凝性试验、鸡胚气管环组织培养试验、干扰新城疫病毒复制试验、RT—PCR和动物回归试验，将四川隆生分离的病毒鉴定为鸡传染性支气管炎病毒(IBV)，并命名为SC0812株。刘兴彩王和平王延树邹立宏尤永君关键词传染性支气管炎分离鉴定中图分类号：$85443文献标识码：A南传染性支气管炎病毒(infectiousbronchitis无菌操作取疑似传染性支气管炎病死鸡肾脏、virus，IBV)引起的鸡传染性支气管炎(infectiousbron—肺脏研磨，用灭菌生理盐水按

8、照1：4体积制备悬chitis，IB)是鸡的一种急性、高度接触性传染病，给世液，反复冻融3次，8000r／min离心5min，弃沉淀，界养禽业造成了严重的经济损失。近年来，虽然鸡