含氢培养液对脂多糖LPS致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

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1、分类号：R-614密级：学位类别：科学学位团专业学位口◎学校代码：1062学号：2010602283又肄眚科鼻号了材婚“lH藕纛爨l薯豁滋鞠麓l鼹嚣黝1臀’、硕士学位论文№～STER’SDISSERTATION论文题目：含氢培养液对脂多糖(LPS)致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用TITLEProtectiveeffectsofhydrogen-richmediumonLPS—inducedinjuryinhumanumbilicalveinendothelialcells一级学科：临床医学二级学科：麻醉学论文作者：韩焕芝指导教师：于泳浩教授导师组成员

2、：谢克亮天津医科大学研究生二。一三年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：熟缱L日期：Z口J；年j一用穷日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、

3、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密团。(请在相对应的方框内打“√”)学位论文作者导师签年瑚加年J7月场日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：脓毒症是一种由感染因素诱发的、以炎症反应为主的综合症，严重时伴有脏器功能障碍，是非心脏重症监护室住院病人的最常见死因，尚无有效的治疗措施。脓毒症时血管内皮细胞被过度、持续、广泛激活，其作为炎症反应的靶细胞及效应细胞，在介导炎症反应持续的同时，其自身严重损伤，最终导致器官稳态破坏，甚至功能衰竭。因此，血管内皮细胞作为脓毒

4、症治疗的靶点具有重要意义。氢气具有抗氧化、抗炎、抗凋亡及信号调节作用，可治疗多种疾病，如缺血再灌注引起的脑、心、肝、肺、肾损伤，神经退行性疾病，糖尿病等。前期研究发现氢气吸入对脓毒症小鼠具有明显的保护作用，其具体机制尚不清楚。本文拟在前期研究的基础上，应用LPS诱导血管内皮细胞损伤，探讨含氢培养液对血管内皮细胞是否具有保护作用以及相关机制，为其临床应用提供实验和理论依据。方法：离体培养人脐静脉内皮细胞株HUVEC．12，以lXl04／mL接种于96孔培养板或以l×106／mL接种于6孔培养板，200gL／孑L或3mL／孑l,。第一部分：分别以浓度为0

5、gg／mL、0．25gg／mL、O．50gg／mL、1．0gg／mL、2．0gg／mL及4．0gg／mL的LPS刺激细胞，孵育24h后，采用MTT法测定细胞增殖活性，根据测定结果选择适宜的LPS刺激浓度，建立细胞损伤模型。分别以浓度为0．15mmol／L、O．3mmol／L及0．6mmol／L的含氢培养液处理细胞，测定24h后细胞活性及LDH释放率，根据结果选择最佳含氢培养液浓度。第二部分：根据第一部分实验结果，本部分实验选择LPS刺激浓度为1pg／mL，含氢培养液浓度为0．6mmol／L(饱和氢培养液)。细胞随机分为4组：正常对照组(C组)、氢气组

6、(H2组)、LPS组和LPS+H2组。C组和LPS组用正常培养液培养；H2组和LPS+H2组用饱和氢培养液培养，同时LPS组和LPS+H2组加入1gg／mLLPS，而C组和H2组加入等容量的生理盐水。应用流式细胞术测定孵育24h后细胞凋亡及ICAM．1及VCAM．1表达情况；应用相应试剂盒测定孵育3h、6h、12h和24h后细胞上清液中MDA水平。第三部分：实验分组同第二部分。应用相应试剂盒分别测定孵育3h、6h、12h和24h后细胞上清液中SOD、CAT活性；分别应用免疫荧光及WestemBlot技术检测孵育24h后Nrf2核移位及蛋白表达水平。结

7、果：第一部分：MTT结果显示：1gg／mL浓度LPS作用24h即可引起血天津医科大学硕士学位论文管内皮细胞损伤，与正常细胞比较差异有统计学意义(P<0．05)。细胞被LPS干预后，细胞生长受到抑制，LPS浓度与细胞生长抑制率成正比，接下来的实验选择LPS的刺激浓度为llag／mL。含氢培养液对正常血管内皮细胞增值活性及LDH释放无明显影响(P>O．05)，可以显著改善LPS所致血管内皮细胞活性降低及LDH释放，且呈浓度依赖性(P

8、皮细胞24h后，细胞凋亡显著增加，其凋亡细胞率、细胞表面ICAM．1及VCAM．1表达较C组和H2组明显升高