基因修饰骨骼肌干细胞构建组织工程骨的实验研究

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1、中国人民解放军军医进修学院博士学位论文基因修饰骨骼肌干细胞构建组织工程骨的实验研究姓名：尚咏申请学位级别：博士专业：骨外科学指导教师：卢世璧;王继芳2003.7.1博士学位论文军医进修学院MMSCsSMSCsMDSCsBMSCsBMPBPBMPR—IABMPR—IBaFGFALPBrdUDBMptuMOIGFPAdBMPsAdGFPD胍MDMSOFGFLMP—lMTT英文缩略词Marrowmesenchymalstemcel1sSkeletalMuscleSLemCellsMusclo—derivedstemcellsBonemarrows

2、temcellsBoneMorphogeneticProteinBoneProteinBoneMorphogeneticProteinreceptorIABoneMorphogeneticProtoinreceptorIBAcidicfibroblastgrowthracLorAlkalinephosphatase，5一Bromo～2’一dexyouridineDemineralizedbonematrixPlaqueformationunitMutiplicityofinfectionGreenflourescentproteinAden

3、oVirusmediatedB^俨sgeneAdnovirousmediatedGreenflourescentproteingeneDulbecco’smodifiedeagle’smediumDimethylSulphoxideFibroblastgrowthfactorsLIMmineralizationprotein一13一[4，5DimethylthyjazoI一2一yI卜2，5diphenyltetrazo】iumbromide)堕主兰垡丝茎兰垦丝笪堂堕GBRGuidedboneregenerationGDFsGr()wthdi

4、fferentialfactors，GTEBGenetjctissueengineeringofbonetl{APHydroxyapatiteFCMFlowcytometerIDBMInactivedemineralizedbonematrix。IGFInsulin—likegrowthfactorsIOPCInducibleosteogenicprecusorcellsNEMN—ethylmaleimideTCPTricalciumphosphateTETissueEngineering2TGF—B0P—lPDGFPGAPLAPMSFPT

5、HrhB～伊sSDB~fSGFTransforminggrowthfactor—D0steogenicprotein—lP1atelet—derivedgrowthfactorPoly91ycolideacidPolylacticacidPhenylmethylsulphonylfluorideParathyroidhorⅡ10neRecombinanthumanBoneMorphogeneticProteinsSpongeofdemineralizedbonematrixSkelet8lgro冉thfactor堕主兰垡笙塞至垦垄堡兰堕一—

6、—基因修饰骨骼肌干细胞构建组织工程骨的实验研究(摘要)近来国内外学者用BMPs基因修饰骨种子细胞使其持续表达BMP并诱导自身向成骨细胞转化来修复大范围骨缺损。骨髓基质干细胞作为基因转染的靶细胞具有取材创伤小，较易培养的特点，f}l短期内细胞扩增量还难以满足临床上修复较大骨缺损的要求。寻找具有来源丰富、取材易且扩增迅速以备基因修饰的种子细胞，并与合适的支架材料相复合构建组织工程骨修复大范围骨缺损乃本文的最终目的。因此，本文分抽rn，D和日zrj阳两部分研究rhB仲一2基因修饰骨骼肌干细胞体外诱导成骨分化和构建基因强化组织工程骨体内修复大范围骨

7、缺损的作用，为临床修复较大骨缺损寻找一种新的途径。实验一rhB肝一2基因转染的兔骨骼肌干细胞体外诱导成骨的实验研究目的评价腺病毒介导的重组人骨形态发生蛋白(Adv—rhB肝一2)基因对兔骨骼肌干细胞(skeletalMusclestemcells，sMscs)体外成骨活性的影响；初步探讨阳离子脂质体介导rhB冲一2转染sMscs的可行性。方法(1)腺病毒介导的基因转染和检测方法在293细胞内扩增Adv—rhB肝一2及Adv_GFP，并用空斑形成实验测定滴度。实验分为三组：I、Adv—rhB仲一2转染细胞组；II、Adv—GFP转染细胞组：I

8、II、未转染细胞组。①从兔后肢股部骨骼肌内分离培养的干细胞经腺病毒转染后(MOI=50)观察转染率和转染后细胞生物学的变化。②腺病毒编码的rhB肝一2基因转染sMscs后检测rh