辐射诱导人正常肝细胞远后效应的相关机理研究

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1、efiectinnormaIcellsByZhaoTingADissertationSubmittedtoUniversityofChineseAcademyofSciencesInpartialfulfillmentoftherequirementForthedegreeofMasterofscienceInstituteofModernPhysics,ChineseAcademyofSciencesMarch,2013关于学位论文使用授权的声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属中国科学院近代物理研究所。本人完全了解中国科

2、学院近代物理研究所有关保存、使用学位论文的规定,同意研究所保存或向国家有关部门或机构送交论文的纸制版和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权中国科学院近代物理研究所可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用任何复制手段保存和汇编本学位论文。本人离所后发表、使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为中国科学院近代物理研究所。保密论文在解密后应遵守此规定。论文作者签名:埤导师签名/籼日期:一原创性声明本人郑重声明:本人所呈交的学位论文,是在导师的指导下独立进行研究所取得的成果。学位论文中凡引用他人已经发

3、表或未发表的成果、数据、观点等,均已明确注明出处。除文中已经注明引用的内容外,不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究成果做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名:—上垒萼L日期:业致谢我的毕业论文是在李强老师的精心指导和大力支持下完成的,他渊博的知识开阔的视野给了我深深的启迪。他严谨的治学态度和敬业精神对我的工作学习产生了深远的影响。在具体的科研生活中,李老师给了我大量的、极其有益的建议和具体的指导,使我得以顺利的完成这三年的科研工作。在此向他表示衷心的感谢。三年的研究

4、生时光匆匆而过,从进实验室到毕业论文的顺利完成都离不开师长、同学、朋友的支持和帮助,感谢陈卫强老师、金晓东、巩莉、李萍、吴庆丰、叶飞、刘雄雄、刘岩、刘新国、戴中颖、贺鹏博、申国盛、黄齐燕及闰渊林在科研工作和生活上的无私帮助。感谢张红、李文建、周光明、胡步荣、王菊芳、周立斌等老师在我论文完成中给予的指导和帮助。感谢在论文撰写和修改过程中给予支持和建议的所有同学和同事。感谢中科院西北特色植物资源化学重点实验室郭勇老师在实验过程中提供的便利条件。向HIRFL-CSR运行组全体人员表示衷心的感谢!感谢人教处邱嵘、华明漪、曹殿亮、梁敏乐和李明智老师三年来在

5、我学习和生活上的热心帮助。感谢近物所对我的培养!感谢我的父母、亲人和男友给我的理解与支持,感谢所有在此期间给予过我关怀和鼓励的同学和朋友们!作者赵婷2013年3月摘要目的:辐射诱导的远后效应和旁效应自从被发现以来就成为了放射生物学及相关领域的研究热点。国内外的研究人员提出各种假说并利用常规射线进行实验试图揭示它们的产生机理,但到目前为止还没有任何一种假说可以完美地解释这些现象,而利用重离子辐射的相关研究就更为稀少。本工作试图结合遗传与表观遗传的改变来对重离子诱导远后效应的形成机理进行探讨,并通过与X射线的实验结果进行对比,为重离子辐射安全性评估、

6、放疗时对正常组织的保护以及二次肿瘤的发生等提供基础数据和科学依据。材料与方法:本实验采用高传能线密度(LET)的12C6+离子束(30keV/p.m)和低LET的x射线分别辐照人正常肝细胞系HL一7702细胞,利用微卫星不稳定性检测来分析直接受照射细胞和通过转移培养基方式的旁细胞培养40天后子细胞所表征的远后效应;利用高效液相色谱法和免疫印迹技术分析上述细胞的甲基化水平和甲基转移酶l(DNMTl)的表达;通过甲基转移酶抑制剂5-aza一2一deoxycytidine(5一AZA)可逆的抑制DNMTl的表达来研究DNMTl与错配修复蛋白(MLHl)

7、的相互关系;通过5-AZA与辐射联用来分析5-AZA的细胞毒性和甲基化模式或甲基转移酶在远后效应发生发展中的作用。结果:(1)微卫星不稳定性(MSI)分析发现12C6+离子束诱导的MSI发生率要低于X射线;旁细胞的MSI发生率高于直接受照射细胞;辐射引起的微卫星不稳定性与杂合性丢失的发生率(LoH)具有位点特异性。(2)X射线和12C6+离子束均会引起人正常肝细胞系HL-7702细胞远后的基因组DNA低甲基化,并伴随DNMTl的低表达,说明远后效应的产生与表观遗传密切相关。T摘要(3)通过对DNMTl、MLHl表达的关系以及MSI、甲基化和DNM

8、Tl表达的相关性分析可推测:错配修复(删R)缺陷可能是远后效应的产生的重要环节。(4)通过照射时抑制DNMTl的表达,可以减小甚至消除辐

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