溴隐亭耐药泌乳素腺瘤组织中相关microRNA的表达研究

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1、温州医学院硕士学位论文答辩委员会成员：温州医学院硕士学位论文目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··1前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··6材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·7结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··12分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．26，j、结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··28参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．29附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··33致谢⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··34综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··35参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．39独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．42眦7I帆g㈣2哪7吣9洲3㈣2㈣Y温州医学院硕士学位论文缩略词PRLBRCDA缩略词表英文全称ProlactinBromocriptineDopaminaticAgonist中文全称泌乳素溴隐亭多巴胺受体激动剂温州医学院硕士学位论文溴隐亭耐药泌乳素腺瘤组织中相关microRNA的表达研究中文摘要目的：泌乳素腺瘤是最常见的垂体良性肿瘤，多巴胺受

3、体激动剂为首选治疗，80％一90％泌乳素腺瘤患者对药物治疗有良好的反应性，但仍有10％一20％泌乳素腺瘤患者对药物治疗无效，这部分耐药病例治疗上非常棘手，即便是手术或立体定向放射治疗，血液中泌乳素(prolactin，PRL)的控制仍然不理想。近年来新发现的microRNA(miRNA)能够高效调控癌基因或抑癌基因的表达而在肿瘤的发生发展中起着关键的调控作用。miRNh通过与mRNAs3’一UTR结合，导致蛋白质翻译的中断或mRNhs的降解，从而影响转录后调节基因的表达，调节生命进程的多个环节。目前mircroRNh在肿瘤及其耐药机制中得到高度关注。本实验目的就是为了筛选泌乳素腺瘤耐药相关

4、的miRNA并研究其机制。方法：以本院从2008．6到2010．10月住院手术治疗的23例泌乳素腺瘤标本为研究对象，根据目前临床认同的耐药定义一(即原发性溴隐亭耐药定义为：正规的溴隐亭治疗后，瘤体积不能缩小或者泌乳素没有降到正常范围。继发性溴隐亭耐药：初期对溴隐亭治疗有效，即常规剂量下瘤体积缩小一半或以下和泌乳素降到正常，但持续溴隐亭治疗下，患者肿瘤体积再次增大或泌乳素水平又重新升高，之后即使加大药物剂量也无效)，将泌乳素腺瘤分为溴隐亭敏感组和耐药组。利用Solexa深度测序技术分析溴隐亭耐药组与敏感组的miRNh表达谱，筛选耐药相关miRNA，并用实时定量PER技术进行验证，再通过San

5、ger数据库以及miRNA预测引擎预测显著差异miRNA调控靶基因，对其进行显著性功能分(GO—AnalysiS)及Pathway显著性分析(Pathway—AnalysiS)，构建差异miRNA与靶基因的调控网络。结果：Solexa测序结果分别获得泌乳素腺瘤敏感与耐药原始小RNA序列(totalreads)10219587和13089472条，其中高质量序列(high_qualty)分别为9442566和12158047条，在泌乳素腺瘤敏感与耐药小RNA序列中，2卜23nt序列共占总序列的60％以上，且在高质量片段中大部分为miRNA；与miRNA数据库(mirBasel4．0)中该物种

6、的miRNA前体进行比对，有399个miRNA成熟体、1i1个miRNA+链和413个miRNA前体在泌乳素腺瘤敏感样品中被发现，在泌乳素腺瘤耐药样品中有424个miRNA成熟体、127个miRNA+链和436个miRNA前体被发现：对miRNA进行预测分析，结果示在泌乳素腺瘤敏感组样品中预测到93种候选miRNA，其相应的miRNA总表达为1584，其长度为2Int和22nt的小温州医学院硕士学位论文RNA首位碱基偏向均为u；在泌乳素腺瘤耐药组样品中预测到44种候选miRNA，其相应的miRNA总表达为1222，其长度为2Int和22nt的小RNA首位碱基偏向A与u。通过对泌乳素腺瘤敏感

7、组与耐药组样品中所表达的已知miRNA的差异分析统计，在两样品之间，表达量存在显著性差异(p<0．01)且表达丰度较高的miRNA有4l条。Realtime—PCR对筛选出来的差异miRNA进行验证，结果发现有显著性差异miRNA有12条，与泌乳素腺瘤敏感组相比，耐药组中hsa-mir一93，hsa—mir一17，hsa—mir一22*，hsa—mir一126．，hsa-mir一142—3p，hsa—mir一144．，h