造血干细胞嵌合体在异种骨髓移植中的实验研究

《造血干细胞嵌合体在异种骨髓移植中的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、第一军医大学硕士学位论文造血干细胞嵌合体在异种骨髓移植中的实验研究姓名：裴夫瑜申请学位级别：硕士专业：儿科学血液病指导教师：李春富20030428英文缩略语词表中文摘要目的为诱导受体对异种供体的免疫耐受，建立小一大鼠的稳定性低嵌合率的异种造血嵌合体诱导模型。并在嵌合率低于10％对，将嵌合体受体鼠的骨髓细胞反向移植给供体鼠，来研究造血嵌合体在克服移植物抗宿主病(GVHD)等方面的作用，并进一步观察反向移植后的新受体的生存期以及嵌合体的变化，初步探讨异种造血嵌合体的维持方法等。方法1、乱8周龄Wister和sD大鼠(清洁级)，60周龄sD大鼠(清浩级)，8～10周龄B

2、ALB／c小鼠(SPF级)，均为雄性、健康。分组进行骨髓移植。2、第一步，SD大鼠经亚致死剂量全身照射后，由尾静脉输入Ba

3、b／c小鼠的骨髓细胞，2天后腹腔内注射环磷酰胺，诱导形成嵌合体大鼠，使其对Balb／c小鼠产生特异性免疫耐受。3、第二步，当嵌合体大鼠的嵌合率低于10％时，BALB／c小鼠经致死剂量全身照射后随机分为三组，A组输入正常SD大鼠的骨髓细胞，B组输入正常SD大鼠的骨髓细胞和脾细胞，C组输入嵌合体SD大鼠的骨髓细胞和脾细胞。对嵌合体小鼠生理指标、嵌合率变化及GVHD发生情况等进行跟踪观察。’4、给予反向移植后的嵌合体BALB／c小鼠，尾静脉重复输注

4、供者(正常SD大鼠)的单纯骨髓细胞，测定嵌合率情况。结果l、在BALB／c小鼠到SD大鼠的骨髓移植中，用TBI(5．OGy)+腹腔注射CTX(100mg／Kg)，注射骨髓细胞量L0×108，能够诱导出较低嵌合率的异种造血嵌合体。经染色体检测和单克隆抗体法证实异种骨髓移2植成功。第30天嵌合率为9．4％～23．85％。第110天嵌合率下降为1．06％～10．48％2、当嵌合体SD大鼠的嵌合率低于10％时，其骨髓细胞经尾静脉输注给仅用致死剂量TBI的BALB／c小鼠，不再使用任何免疫抑制药物。FACS测定嵌合率，第30天为1．17-一60．2％之间，第120天下降为0

5、．88~2t34％。3、骨髓移植第45天，嵌合体BALB／c小鼠脾细胞对供者嵌台体SD大鼠及正常SD大鼠脾细胞产生了MLR明显下降，’S1值分别为1．23±0．15，1．13±0．16；而对第三者Wister大鼠仍有强烈增殖反应，MLR．SI值为2．40+0．26。前两者问差异无显著性(P>0．05)，但都与后者有显著性差异(P

6、、体毛脏乱、腹泻等，肝脏、小肠切片均有明显的病理改变，主要表现为：肝实质内可见局灶性坏死，有灶性淋巴细胞及多形细胞浸润：肠粘膜结构破坏，部分脱落，有坏死灶和炎性细胞浸润。上述变化符合GVHD病理改变。实验C组，只有1只发生了轻度的GVHD，但小鼠外观表现不明显。B、c组都没有观察到慢性GVHD。5、异种骨髓移植第2．3周，反向移植BALB／e小鼠外周血白细胞下降最明显，体重下降最低，死亡率最高。第15天时，体重开始回升，但外周血自细胞总数继续下降。第60天，体重、外周血白细胞已与正常BALB／c小鼠无明显区别。但白细胞总数始终相对低于正常BALB／c小鼠同期正常值

7、。第90天，小鼠体重增幅缓慢，外周血白细胞又有所下降，与第0天相比，差异有显著性(P0．01)。6、以150天为统计，实验A组13天内死亡5只，其余长期存活，没有发生GVHD现象。实验B组平均累积存活期为16天，95％可信区间(13，19)，其中有4只小鼠因重度GVHD死亡。实验C组只有1只死于轻度GVHD。三组的生存期水平间的整体比较有统计学意义，差异有显著性(P<0．0006)；而水平间的两两比较(Log-Rank)，C组与A、B组差异有显著性(P值均小于0．05)；A、

8、B组之间差异无显著性(P=O．4538)。7、当嵌合率低于5％时(第120天)，给嵌合BALB／c小鼠经尾静脉注射正常sD大鼠单纯骨髓细胞。第一次给予骨髓细胞8×lO7／只。一个月后(第150天)用单克隆抗体法上FACS测定，嵌合率为0．20～1．00％。重复上述操作，第二次输注单纯骨髓细胞为2×108。一个月后(第183天)嵌合率在0．301．19％。结论t、SD大鼠经亚致死剂量5．0G少全身照射后，加单剂腹腔内注射环磷酰胺100mg／Kg，可以成功诱导形成小鼠一大鼠低嵌合率的异种造血嵌合体模型。SD大鼠对TBI不敏感，但对CTX十分敏感，而BALB／c小鼠则与

9、之相反。2