塔形毛白杨CVBJHR01再生体系的建立及Bt抗虫基因工程的研究

《塔形毛白杨CVBJHR01再生体系的建立及Bt抗虫基因工程的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、东北林业大学硕士学位论文塔形毛白杨CV--BJHR01再生体系的建立及Bt抗虫基因工程的研究姓名：冯妍申请学位级别：硕士专业：细胞生物学指导教师：戴绍军；魏建华201006摘要杨树是我国重要的生态防护林与工业用材树种。但是杨树虫害严重，每年因虫害造成了巨大的经济损失。随着杨树抗虫基因工程的发展，一些重要的抗虫基因，特别是历基因，已经成功用于杨树病虫害的防治，并取得了丰硕的成果。本研究以华北地区优良的生产品种塔形毛白杨CV-BJHR01(PopulustomentosaCarr．删‘BJHR01’)为受体材料，以经改造的Bt886

2、cry3Aa基因为目的抗虫基因，经过组培再生体系的建立、遗传转化系统的验证、抗虫基因的转化等一系列研究，培育出表达厨蛋白的转基因毛白杨新品系。具体取得以下结果：(1)对培养基配方、培养条件以及外植体类型进行探索，建立并优化了塔形毛白杨CV-BJHR01的组培再生体系。这对于优良品种的推广和种质资源的保存具有重要意义，同时为基因工程育种奠定基础，也为促进农林复合生态系统的健康发展提供了科技支撑。(2)通过对gus基因的瞬时表达检测，建立并验证了整个遗传转化系统的可行性。同时对转化体的抗性筛选压进行了摸索，确定了最适的抗生素筛选浓度

3、，为抗虫基因的顺利转化奠定了基础。(3)通过农杆菌介导的遗传转化，将目的基因转入了塔形毛白杨CV-BJHR0l的基因组中，PCR检测确定64株为转基因阳性植株。PCR-Southern杂交进一步验证了PCR检测结果。利用mBt．Cry3AImmunoStrip检验目的抗虫基因在植物体内是否有蛋白表达，结果表明，64株PCR阳性植株中有12株呈蛋白阳性反应，以mBt．Cry3AELISA实验再次验证呈蛋白阳性反应的植株，发现其OD600的吸光度普遍高于对照植株，证明已获得多个抗虫毛白杨转基因株系。关键词塔形毛白杨；再生体系；抗虫；

4、历基因；转基因AbstractPoplarisallimportantspeciesofecologicalshelterforestandindustrialtimber．Butthepoplarpestsaresoseriousthatenormousmoneyloseseveryyear．Withthedevelopmentofinsect-resistantgeneticengineeringinpoplar,someimportantinsect—resistantgenes，especillyBtgene,haveb

5、eensuccessfullyusedforpreventionandtreatmentofdiseases，andwehaveachievedsubstantialresults．nePopulustomentosaCart．cv'BJHR01’，whichissuperiorvarietiesinNorthChina,wasusedfitsthematerialinthisstudy．ThemodifiedBt886cry3AagenewastakenaSthetargetinsect-resistantgenes．Wees

6、tablishedthesystemsfortissuecultureregenerationandgenetictransformation，andfinishedthetransformationofinsect-resistantgenes．Basedonthis，thenewBtproteinexpressedstrainofPopulustomentosawasgained．Ourdetailedresultsaleasfollowing：(1)Byexploringthemediaformulation，cultur

7、econditionsandexplanttypes，weestablishedandoptimizedthetissuecultureregenerationsystemofPopulustomentosaCart．c矿BJHR01’．Thisisimportanttospreadthefinevarietiesandpreservethegermplasmresources．Moreover,ourresultssetupthefoundationforgeneticengineering，andprovidesthesci

8、entificandtechnologicalsupportforthehealthydevelopmentoftheagroforestryecosystem．(2)Bytestingthetransientexpressionofgusgene，weesta