微生物学实验课-实验二培养基的配制和灭菌

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1、实验二培养基的配制和灭菌1!一、实验目的1.了解配制培养基的原理，并掌握配制培养基的一般方法和步骤。2.学习几种常用培养基的配制、分装和灭菌的操作方法.3.进一步熟练掌握手提式高压蒸汽灭菌锅的使用方法。二、实验器材1.药品及试剂：可溶性淀粉，KNO3,K2HPO4-3H2O,MgSO4-7H2O,FeSO4-7H2O,lmol/LNaOH,琼脂，牛肉膏，蛋白腺，NaCl2•仪器及其它试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻棒、天平、药匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸(5.5-9.0)、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、干燥箱、培养皿、涂布棒、吸管

2、(1ml)、玻璃珠、PH试纸三、实验内容1.分组配制高氏一号培养基300mlo配方：可溶性淀粉20gNaClO.5gKNO3lgK2HPO4-3H2O0.5gMgSO4-7H2OO.5gFeSO4-7H2OO.Olg琼脂15-25g水1000mlpH7.4-7.62•配制牛肉膏蛋白月东培养基配方：牛肉膏1.5g蛋白腺5gNaCl2.5g琼脂7.5g水500mlPH7.4-7.63.每组制备玻璃珠无菌水（45ml）三角瓶2个。4.每组制备无菌水试管（4.5ml/管）10支。5•每组包9cm培养皿24套，6套为一包。6•每组包lull

3、吸管5支，玻璃刮铲4个。四、方法步骤（一）培养基的制备与分装1•称量按培养基配方比例依次准确地称取药品。可溶性淀粉先用少量热水溶化后再加入其他成份，补足所需水分，混匀后加入琼脂。2•熔化在沸水浴锅中加热熔化。3.调pH用lmol/LNaOH调pH至7.4-7.6。4.过滤趁热用多层纱布过滤（本实验勿需过滤）5•分装将溶化的固体培养基趁热加至漏斗上，装试管时，注意管口不要沾上培养基。液体分装装量不超过试管的1/4,固体分装装量不超过试管的1/5,分装三角瓶的量不超过三角瓶容积的一半，半固体分装装量为试管的1/3,灭菌后垂直待凝。6•

4、加棉塞培养基分装完毕后，在试管口或三角瓶口塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能，然后包扎一层牛皮纸。试管应先捆成一捆后再于棉塞外包扎牛皮纸，贴上标签，注明培养基名称、日期、组别。（―）无菌水的制备7.用量筒量取45ml水于带玻璃珠三角瓶中，塞上棉塞，包扎牛皮纸。8.用5ml吸管取4.5ml水于试管中，塞上棉塞，包扎牛皮纸。（三）器皿的准备9•培养皿的包装每6套一包，用旧报纸包扎（或放在特制铁皮圆筒里，加盖扣严）。10•吸管的包装首先在吸管的上端塞上一小段棉花，用长纸条包扎、打结。11.玻璃涂布棒

5、的包装方法同吸管的包装。（四）培养基、无菌水、器皿的灭菌12.将培养基、无菌水放入高压蒸汽灭菌锅内，1.05kg/cm2压力，121.3°C,20min湿热灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。13.灭菌完毕，将试管培养基冷至50°C左右，将试管棉塞搁在玻棒（或木棍）上，搁成斜面，搁置的斜面长度以不超过试管总长度的一半为宜。14.将灭菌的培养基放入37°C的温室中培养24〜48h,以检查灭菌是否彻底。15•器皿放入干热灭菌箱内，加热灭菌。五、思考题1•培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基是无菌的？

6、2•加压蒸汽灭菌的原理是什么？是否只要压力表上的指针指到所需的压力时就能达到所需灭菌温度？为什么？3.干热灭菌应该注意哪些事项？4.管口、瓶口为什么要用棉塞？能否用木塞或棉皮塞代替？为什么？