以ispd为靶点的新型抗结核药物筛选研究

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1、京碱皆ｆ從中钟３巧＞硕±研究生学位论文北京协和医学院研究生院：学校代码１００２３学号：Ｓ２００的８１２０１硕±学位论文ＩｓｐＤ为帮点的新型抗结核药物筛选研究所院；医药生物技术研究所姓名：鲁众阳指导教师：肖春玲教授学科专业；药学研巧方向；抗感染药物研巧完成日期：２０１５年４月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加Ｗ标注和致谢的地方外，不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与

2、我一同工作的同志对本研巧所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。／〇学位论文作者签名；Ｖ签字日期：年月日／Ｉ学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解北京协和医学院有关保存、使用学位论文的管理办法，允许论文被查。有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘阅和借阅。本人授权北京协和医学院可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）為、：学位论文作者签名：导讯签名聲签字日期《＞；＾［年月＾日签字日期年月八日

3、２＾学位论文作者毕业后去向：Ｉ工作单位：电巧：通讯地址：邮编：？中国医学科学院？北京协和医学院硕±学位论文目录ＩｓＤ１Ｗｐ为鞭点的新型抗结核药物筛选研究缩略语表１中文摘要３英文摘要４前Ｓ６１０实验材料与仪器１菌株及细胞１０２基因组和质粒１０３培养基１０－３．１ＣＯ＆培养基１０３．２分杆杆菌培养基１１３．３其他菌株药敏实验所用培养基１１３．４Ｖｅｒｏ和ＨｅｐＧ２培养基口４主要试剂１２５溶液１２５．１抗生素溶液１２５．２蛋白相

4、关溶液１３６试剂盒１４７工具酶１５８主要仪器１５实验方法１６１基于ＭＴＢ的表型筛选１６１．１化合库中样品的初筛１６１１．２化合物样品的拆分及复筛６２ＭＩｓｐＤ酶抑制剂的筛选１６２．１Ｚ却〇基因的扩増１６ｉ中国医学科学院？北京协和医学院？硕±学位论文２１８．２表达载体的构建１２２．３表达菌株的构建２．４ＭＩｓｐＤ蛋白的诱导表达２２２．５ＭｄｓｐＤ蛋白纯化及蛋白质含量测定２２２．６ＭｒｔｓｐＤ蛋白的定量２４２ＳＤＳ－ＰＡＧＥ２４．７ＭｒｔｓｐＤ蛋

5、白的电泳检测２．８ＭＩｓｐＤ活性测定原理及方法２６２．９ＭＩｓｐＤ酶活性测定体系优化２６２１０ＭｄｓＤ抑制剂筛选２７．ｐ模型的确立３抑制剂半数抑制浓度２９（ＩＣｓｏ）测定４抑制剂的体外抗结核活性测定２９５抑制剂抗菌谱活性测定３０ＭＢ－４９０３０６化合物Ｉ１对ＭｄｓｐＤ的动力学研究Ｂ－４９０７化合物ＩＭ１的细胞毒性研究３０８ＭｆＩｓｐＤ可控表达菌株的构建３１８３１．１构建ＭｆＩｓｐＤ可控表达菌株的目的及意义８ｓ３２．２ＭｒｔｐＤ可控表达质粒构建流程８．３崎姐基因前３２０ｂｐ的获得３

6、２ＰＣＲ８．４产物的纯化３３８．５纯化的ＰＣＲ产物双酶切处理及回收３４４７９３４８．６ｐＡＺＩ９的双酶切处理及片段回收８．７酶切后崎沁前３２０ｂｐ与ｐＡＺ巧４７９连接３５８Ｈ５ａ感３５．８连接产物转化Ｄ受态细胞８．９阳性克隆鉴定３５８１０阳性克隆质粒的提取３５．８．１１重组质粒测序３６３７ＲＶ３６８１２重组质粒ＡＺＩ：：Ｄｉａｎ３２０ｂ．９４７９电转入Ｈｐ邮ｑｐ实验结果３７１基于ＭＴＢ（Ｈ３７ＲＶ）表型筛选抗结核活性化合物３７７２ＭｒｔｓｐＤ酶抑制剂的筛选３２．１

7、表达质粒ｐＥＴ２８ａ（＋）：；！句记的构建与验证３７２．２ＭｒｔｓｐＤ蛋白的制备３９中国医学科学院？北京协和医学院？硕±学位论文２４１．３酶活力测定２４４２．酶活测定体系的优化２５ＭｒｔｓＤ４４．ｐ抑制剂筛选模型２ＭｄｓＤ抑制剂的筛选４４．６ｐ３ＭｆＩｓｐＤ抑制剂对Ｈ３７ＲＶ的最低抑菌浓度（ＭＩＣ）４５４ＭｆＩｓｐＤ抑制剂的抗菌谱４６５－４９０化合物ＩＭＢ１对Ａ／过ｓｐＤ的抑制动力学研究４７－４９０４８６化合物ＩＭＢ１对肝肾细胞毒性研