应用内质网应激模型评估纳米银的体内体外毒性

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1、－？分类号密级么气ＵＤＣ编号１０５５５＠杂＃义多硕±学位论文应用内质网应激模型评估纳米银的体内体外毒性研究生姓名：赵琳指导教师、职称：陈锋教授合作导师、职称：陈春英研究员专化学位类别（领域）；公共卫生与预防医学研究方向：卫生毒理学所在学院：南华大学公共卫生学院中国科学院国家纳米科学中也二０—五年五月论文题目应用巧盾网应激摸型评化纳米银的体巧体外妻性论文作者签名；絲指导教师签名砰论文评阅人１：导安勤教释碱每你子、食絲ａｉｌ孩评阁人２：输教旋麟齡撫獅中作文帥軒评阅人３；

2、答辩委员会主席：游Ｉ竞激辕解巧辦ｆｔ丧娘游Ｉ化巧委员１：Ｓ載撫龄鋪棋項耗納腺偉＇公抑甲昨宁委员２；部耐故後破ｊｒ觀诚《衣ｇ！忘阵＾委员３：问活巧占拖始龄私片捧巧我ｎ＞！委员４］；：誠帥忌＾推帝说锭种新势委员５：委员６：答辩日期＜？ａ年立月ｆ相；＞南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研巧工作及取得的。］研究成果，除了论文中特别加１，尽我所知［＾标注和致谢的地方外论文中不包含其他人己经发表或撰写过的硏巧成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本

3、研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：方。年＾月ｆ＾日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读（博／硕）±学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研巧成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得Ｗ其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使巧学位论文的规定，目Ｐ；学校有权保留学位论文，允许学位论文被查綺和借阅：学校可公布学位论文的全部或部分内容，可１＾＾采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部口规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀

4、博硕±学位论文全文数据库》，并按《中国优秀博硕±学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研巧所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后造用该授权。作者签名；月｜＆日导师签名；？蛛ｆ月ｆｆｅ曰应用内质网应激模型评估纳米银的体内体外毒性摘要：本文分为两部分：第一部分：目的：探讨纳米银（AgNPs）对小鼠巨噬细胞（RAW264.7）毒性效应的影响，为AgNPs生物安全性的研究提供依据。方法：将不同浓度的AgNPs（0，6.25，12.5，25，50，60，80μg/

5、mL）和RAW264.7共同培养，8或24h后采用甲基噻唑基四唑比色法（MTT）法测定各组细胞的活力，选取2.5μg/mL和5μg/mL两个无明显细胞毒性的浓度进行后续研究，检测应激相关基因和蛋白表达的变化；酶联免疫吸附实验（ELISA）检测细胞培养液中炎症因子TNF-α和IL-6的表达。结果：用2.5μg/mL和5μg/mL的AgNPs处理细胞：24h后相差显微镜下可见纳米颗粒进入细胞内，且5μg/mL组的细胞形态有明显改变；8和24小时后ELISA结果显示IL-6无明显变化，在5μg/mL的24h处理组TNF-α表达有显著升高，内质网应激相关的基因和蛋白在5μg/mL的24h处

6、理组表达明显上调。结论：RAW264.7细胞暴露于低剂量的纳米银后表现出明显的应激反应，并且与暴露的剂量和作用的时间存在正相关性；AgNPs的能够进入RAW264.7细胞，可能是其产生毒性效应的必要条件。低剂量的AgNPs会干扰细胞的正常生理功能，长期暴露可能产生不可逆的损伤，应引起高度关注。I第二部分：目的：研究纳米银经静脉注射后的主要靶器官分布及应激效应，为评估AgNPs对人体健康和环境的毒性影响提供理论依据。方法：Balb/c小鼠经尾静脉注射不同剂量（0.2、2、5mg/kg）的AgNPs8h后，检测AgNPs在体内各器官的生物分布、内质网应激、氧化应激等，评估小鼠暴露AgN

7、Ps后早期毒性效应。结果：应激相关标志性的蛋白质和基因呈剂量依赖性的显著上调，其中在脾、肝、肺、肾中最为明显，并且导致急性毒性反应；表明小鼠暴露于AgNPs后，脾、肝、肺、肾是AgNPs毒性的主要靶器官；心脏和脑中也有AgNPs存在，但本研究并未检测到毒性反应。结论：组织细胞早期暴露于AgNPs后会产生应激反应，如果应激反应逐步增加可以对靶器官造成永久的毒性损害，提示在AgNPs的毒性的评估中需认识到应激相关标志物的重要性。关键词：纳米银（AgNPs）；毒性；内质网应