基于甘露糖受体的黑灵芝多糖免疫调节作用及机制研究

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1、分类号：密级：公开UDC：学号：405605112088南昌大学硕士研究生学位论文基于甘露糖受体的黑灵芝多糖免疫调节作用及机制研究StudyonimmunomodulatoryeffectsandmechanismsofapolysaccharidefromGanodermaatrumbasedonmannosereceptor（国家自然科学基金青年项目：31201326）帅小雪培养单位（院、系）：食品学院指导教师姓名、职称：谢明勇教授申请学位的学科门类：理学学科专业名称：营养与食品卫生学论文答辩日期：2015年5月31日答辩委员会主席：评阅人：2015年5

2、月31日一、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研宄成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：忡Khf签字日期：淡工年艾月引曰二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借

3、阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务,p意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：怍小蜃导师签名（手写签字日期：年r月引日签字日期年（论文题目甘f癩旻饰胡f趸t务嫡吏褒谲辛作用丨各脉糸丨砷资姓名iM-thf学号论文级别博士□硕士s/院/系/所专业公开□保密（向校学

4、位办申请获批准为“保密”，年月后公幵)摘要摘要多糖被证实具有免疫调节、抗炎、抗肿瘤、降血糖、降血脂等多种功能，其中免疫调节作用是众多多糖类物质的最基本的作用，该调节方式主要通过以下几个途径实现：直接或间接激活巨噬细胞、NK细胞和T、B淋巴细胞；促进细胞因子的生成与分泌；激活补体系统；促进抗体产生等。近年来研究发现，多糖激活免疫细胞发挥免疫调节作用主要是通过与细胞表面的受体相结合而介导的。目前发现的受体主要包括Toll样受体（TLRs）、甘露糖受体（MR）、树突状细胞相关C型凝集素-1（Dectin-1）、补体受体3（CR3）、清道夫受体（SR）等。多糖与这些

5、受体结合后可以激活细胞内信号通路，进而活化免疫细胞，促进细胞因子的释放调节免疫反应。MR可识别含甘露糖或岩藻糖残基的多种糖分子，是先天免疫系统中重要的模式识别受体和内吞受体，主要存在于巨噬细胞和树突状细胞的细胞膜表面，在维持内稳态、识别病原体、诱导细胞因子、抗原递呈等过程中发挥重要作用。TLRs则是目前所发现的受体中与多糖关系最为密切的一类。黑灵芝既是我国传统的药用真菌也是民间常见的食品配料，它具有多方面的生物活性。本实验室从黑灵芝中分离纯化出一种水溶性多糖（PSG-1），综合现代化学分析方法，解析出了其结构特征，结果表明PSG-1的单糖组成为甘露糖、半乳糖

6、和葡萄糖，摩尔比为1：1.28：4.91。实验室前期研究已确定PSG-1具有增强宿主免疫功能的作用，在此基础上开展MR的研究对深入了解PSG-1活性功能与免疫机制，以及基于MR为靶向的黑灵芝的深度开发具有重要意义。因此，本实验探讨了PSG-1的免疫调节作用与MR的关系以及在LPS诱导的巨噬细胞中PSG-1激活的TLRs信号转导通路与MR的关系。主要研究内容如下：1、PSG-1对小鼠腹腔巨噬细胞MR的影响：为了探讨PSG-1对正常小鼠腹腔巨噬细胞MR的影响，本实验将20～160μg/mLPSG-1作用巨噬细胞后，用流式细胞仪测定细胞表面MR的表达，RT-PCR

7、检测巨噬细胞MR的mRNA表达水平；以MR抑制剂甘露聚糖预处理细胞30min后加入PSG-1，用流式细胞仪检测巨噬细胞的吞噬功能，酶联免疫法测定培养上清液中肿瘤坏死因子-α、白细I摘要胞介素-1β的含量，RT-PCR检测细胞TNF-α、IL-1β的mRNA表达水平。结果显示PSG-1可上调巨噬细胞表面MR的表达及MRmRNA水平；与单独PSG-1处理组相比，甘露聚糖预处理可明显抑制PSG-1增强的巨噬细胞吞噬功能和诱导细胞分泌IL-1β，对TNF-α的分泌则无影响。结论：MR能部分介导PSG-1对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节作用。2、PSG-1对LPS刺激的小

8、鼠腹腔巨噬细胞MR的影响：为了探讨PSG-1对LPS