针刺促samp8小鼠海马神经元突触可塑性的能量转运机制研究

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1、学位论文针刺促SAMP8小鼠海马神经元突触可塑性的能量转运机制研究EneT-rgyransortationmediatedEnhancementofSnapticPlasticitpyyinHippocampalNeuronsofSAMPSbyAcuunc化rep刘奇指导教师姓名:余曙光研究员申请学位级别:博古专业名称:针灸推拿学.05论女答辩时间.0论文提交时间:2015:20155二〇—五年五月成却中匯药大学详壬学位备文中文摘要目的:’本研巧W阿尔兹海默病(Alzheimers

2、disease,AD)模型SAMP8小鼠为研究对象,通过观察针刺对海马神经元突触可塑性,^^及葡萄糖、乳酸含量写其转运体的影响,从神经元能量物质转运的角度探讨针刺促海马神经元突触可塑性机制,为针刺治疗AD提供实验依据。方法I采用Morris水迷宫进巧行为学检测,筛选出43只学习记忆能力减退的SAMP8小鼠作为AD动物模型,随机分为SAMP8组与SAMP8+针刺组。W20只同月龄SAMRI小鼠作为对照。""""百会涌泉一20、,每天治巧次,每次分钟5选取进行针刺治疗,天一为个疗程,每个疗程结束后休息2天,共治疗8巧程。治疗结

3、束后,采用水迷宫进斤定位航行、空间探索实验,采用透射电镜观察小鼠海马CA1区神经元突触后致密带(postsynapticdensity,PSD)厚度、突触间隙宽度、突触界面曲率I的变化,充分评价针刺治疗效应运用在体脑微透析联合SCUS,检;检测技术测脑部海马区葡萄糖、郭酸等能量底物含量,并取海马组织,运用免疫姐化、蛋白免疫印迹法检测海马葡萄糖转运体3(glucosetransporter3,GLUT3)、单殘酸转运体2(monocarboxylatetransporter2,MCT2)、单簇酸转运体4(mono

4、carbQxylatetransporter4MCT4),总表达量及亚区变化。结黑1.学习记忆能为结果。Morris水迷宫结果提示,与SAMR1组相比,SAMP8组逃避潜伏期显著延><长(/0.01),第1天游泳总路程増加(f<0.05),第2天至第5天游泳总路程盈著増加(fCO.Ol);目标象限游泳路程百分化、目标象限游泳时间百分比显著f<0.01)平台次数、穿越有效区次数显著减少(f<0.01)示SAMP8下降(,穿越,提组小鼠学习能力、记忆能为均下降,符合AD的病例特征变化。经过8个疗程的第i页成却中&苗大

5、学详壬学化冷文'5针刺治疗,AMP8+针刺组第4天、第,与SAMP8组相比S天逃避潜伏期、游泳总路程缩短(f<〇.〇5);目标象限游泳路程百分比、目标象限游泳时间百分比升高(f<0.05),穿越平台次数差异不具有统计学差异(P>0.05),穿越有效区次数増加(P<〇.〇5)。表明针刺有效地改善了SAMP8小鼠的学习记忆能力。2.突触可塑性结果。电镜结果提示,与SAMR1组相比,SAMP8組小蘭海马神经元PSD厚度显8SAMP8经过,与组著降低,突触突触间隙宽度显著増加;个巧程的针刺治疗相比,SAMP8+针刺组小鼠海马神经元P

6、犯厚度増加(户<0.05),突触间隙宽度减小(户<0.05)。表明针刺可W促进海马神经元突触结构可塑性的发挥。3、.葡萄糖海马現酸、丙丽酸检测结果。探针回收率结果表明,CMA7探针对SAMP8小鼠海马乳酸的回收率为1625%,.1%,提示符合实验技术要求。与SAMR1姐相.葡萄糖的回收率为198比,SAMP8沮小鼠海马孔酸、葡萄糖、丙爾酸含量均显著降低(f<0.01)。经过8个疗程的针刺治疗,与SAMP8组相比,SAMP8+针刺组小鼠海马乳酸、葡<1)萄糖、丙丽酸含量均显著降低0.0。4.海马能量底物转运蛋白检测结果。蛋白免疫

7、印迹结果表明,与SAMR1沮相比,SAMP8组GL17T3、MCT2表达显著降低(f<0.01),MCT4表达差异不具有统计学差异(P>0.05);海马亚区免疫组化检测结果表明,GLirn表达的降低出现在CA1亚区(PCO.Ol)、DG亚区(fCO.On化及CA3亚区(尸<0.05);MCT2表达的降低出现在CA1亚区(户<0.01)、CA3亚区(fCO.Ol)和DG亚区(fCO.Ol);而MCT4的表达在CA1亚区显著降低(户<0.01)。经过8个疗程的针刺治疗,与SAMP8组相比,SAMP8+针刺姐小鼠海马GLUT3、MC

8、T2总表达量显著升高(P

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