用于apoe和pld3基因分型的pcr-金磁微粒层析系统的建立及其临床应用

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1、分类号：Ｑ５学校代码；１０６９７密级：公开学号：２０１１１０１６９＾聲憶±亨恆巧交ＤＯＣＴＯＲＡＬＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ用于ＡｐｏＥ和化Ｄ３基因分型的ＰＣＲ－金廢微粒层析系统的建立及其临床应用生物化学与分子生妖学作者：廉婷指导老师：崔亚丽教授西北大学学位评定委员会二〇—五年ＰＣＲ－ＬａＦｌｏｗＧｏｌｄＭａｇｔｅｒａｌＡｓｓａａｎｄｉｔｓＣｌｉｎｉｃａｌｙＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒＧｅｎｏｔｙｐｉｎｇｏｆＡｐｏＥａｎｄＰＬＤ３Ｐｏｌｍｏｒｈｉｓｍ

2、ｓｙｐＡｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｓｕｂｍｉｔｅｄｔｏＮｏｒｔｈｗｅｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｉｎａｒｔｉａｌｆｕｌｆｉｌｌｍｅｎｔｏｆｔｈｅｒｅｕｉｒｅｍｅｎｔｓｐｑｆｏｒ也ｅｄｅｇｒｅｅｏｆＤｏｃｔｏｒｏｆＰｈｉｌｏｓｏｐｈｙｉｎＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙＢＬｉａｎＴｉｎｙｇＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：ＰｒｏｆｅｓｓｏｒＣｕｉＹａｌｉＤｅｃｅｍｂｅｒ２０１５西北大学学位论文知识产权声明书、保存。本人完全了解西北大学

3、关于收集、使用学位论文的规定学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版。本人允许论文被查阅和借阅。本人授权西北大学可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所等机构将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》或其它相关数据库。保密论文待解密后适用本声明。三／今学位论文作者签名：＾指导教师签名：７＾Ｖ心心ｆ矣年。月＆日年／月户日西北大学学位论文独创性声明本人声明：所呈交的学位论文

4、是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，本论文不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得西北大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：口／主年立／主月８＞日用于ＡｏＥ和化Ｄ３基因分型ＰＣＲ－金蹈微粒层析系统的ｐ建立及其临床应用研究中文摘要单核昔酸多态性一（ＳｉｎｇｌｅＮｕｃｌｅｏｔｉｄｅＰｏｌｍｏｒｈｉｓｍｓＳＮＰｓ）ｙｐ，

5、作为新代的遗传标志物，被作为评估疾病易感和药物响应的重要因子。如载脂蛋白Ｅ（ＡｏｌｉｏｒｏｔｅｉｎＥｐｐｐ，ＡｐｏＥ）具有与脂质和受体结合的功能，不但在脂质代谢中起关键作用，同时也参与神经系统的正常发育生长过程及其损伤后修复，其基因多态性与必血管疾病Ｗ及神经退行性疾病，如阿尔茨海默症（ＡｌｚｈｅｉｍｅｒｄｉｓｅａｓｅＡＤ）的相关性备受关注。，磯脂酶（Ａ１、Ａ２、Ｂ、Ｃ和Ｄ）可特异地作用于磯脂分子内部的不同醋键，通过不同产物的形成调节脂类代谢。踞脂酶Ｄ３（ＰｈｏｓｈｏｌｉａｓｅＤ３ＰＬＤ３）基因２０１

6、４年被报道是欧洲ｐｐ，人群新发现的ＡＤ易感基因，其罕见突变Ｖ２３２Ｍ和Ａ４４２Ａ可将个体生命后期患阿尔茨海默氏症的风险提高２倍。随着我国老龄化加剧和慢病检测和管理的亟需，对大样本人群开展疾病易感基因的筛查，不仅能获得针对中国人群特定基因位点与疾病相关的数据库，还可达到疾病预防的目的，节约大量的医疗资源。而建立快速、准确、经济且适于各级医疗机构的通量ＳＮＰ分型技术显得尤为重要。基因分型常用方法包括测序、实时萊光定量ＰＣＲ、基因芯片杂交、质谱等，这些方法具有通量高，准确，灵敏度高等优势，但对于临床样本分析依然存

7、在仪器设备昂贵，检，操作过程繁琐，对检测人员的专业技术要求高等不足之处测周期长。近年来，基于纳米粒子的ＤＮＡ检测技术发展迅速，纳米颗粒和层析技术的联合应用，可实现目视化检测目的ＤＮＡ－。本研究采用团队发明的ＰＣＲ金磁微粒层析技术，建立了ＡｐｏＥ和ＰＬＤ３的基因分型检测方法，对临床相关疾病的全血样本进行了ＳＮＰ检测，为进一步开展易感基因的筛查奠定了基础。研究目的－Ｗ纳米金磁微粒为载体，构筑便捷准确的等位基因特异性ＰＣＲ（ＡＳＰＣＲ）产物检测的快速层析系统，将其用于ＡｐｏＥ基因分型和ＰＬＤ３基因罕见突变检

8、测系统的构建。收集相关临床样本，对阿尔茨海默症及缺血性脑卒中患者的基因型进行筛查，并探讨基因多态性与疾病易感性之间的相关性，为疾病的临床诊断提供分子生物学指标。方法及主要研究结果Ｉ方法学