牙鲆（paralichthys olivaceus）丝氨酸蛋白酶i-1与c型溶菌酶基因的多态性研究

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1、闻斯义々）寸ｆ’變－’（ＫｌＡＮＩＮｉＶＩＲＳｉｒＶＯＫ（川ＮＡ硕ｉ学位论文ＭＡＳＴＥＲＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ１牙鲜（戶口ｒａ／／ｃ片娜ｓｏ＂ｖ幻ｃｅＭ＊ｓ）丝氨酸蛋白酶＾Ｃ论文题目：与型溶菌酶基因的多态性研究ＴｈｅＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｏｆＳｅｒｉｎｅＰｒｏｔｅａｓｅａｎｄ－ｅＣｔｙｐＬｓｏｚｙｍｅｉｎＪａａｎｅｓｅＦｌｏｕｎｄｅｒｙｐｉ英文题目：｛Ｐａｒａｌｉｃｈｔｈｙｓｏｌｖａｃｅｕｓ）作者：付瑞雪指导教师：于海洋副教授

2、学位类别：全日制学术学位生物化学与分子生物学专业名称：研究方向：分子生物学与生物资源＇ｆ．ｉｒｔ．ｉ—？４谨１＾（此论文献给我擎爱的父母和敬爱的导师付瑞雪鱼平尸ａｒａ－ｌ牙（／／ｃ／２／／２ｗｏ／／ｗｃｅｗ）竺氨酸蛋白酶Ｉ与；Ｃ型溶菌酶基因的多态性研究鈍：学位论文完成日期－一心指导教师签字：ｓｗ＼答辩委员会成员签字：１．知／主．—独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，

3、除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得或其他教育机构的学位或证书使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。：学位论文作者签名签字日期Ｃ，的年ｒ月日学位论文版权使用授权书，本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定并同意■下事项：１．学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。２．学校可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据

4、库进行检索，可Ｗ采＂用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学中国＂学术期刊（光盘版）电子杂志社用于出版和编入ＣＮＫＩ《中国知识资源总库》，授权中国科学技术信息研巧所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名导师签字：签字日期：年月日签字日期＾：年ｒ月日＾－ａｒａｃ＂牙鲜（戶／／／２说ｙｉｏ／ｚＶｏｃｅｗ）丝氨酸蛋白酶Ｉ１与Ｃ型溶菌酶基因的多态性研究摘要＇牙Ｉｆ（ｆａｒｏ／ｚｃ斯吟■ｙｏ＂ｖ

5、ａｃｅｗ）是我国重要的海水养殖鱼类。牙辑口感较好，营养价值丰富，受到消费者的喜爱，具有重要的经济价值。牙辑养殖业在２０世纪８０年代得到了迅速发展。但是随着养殖密度的增大，，牙解养殖环境不断恶化，严重影响产量，病害频发，同时也造成了抗生素滥用等现实问题。因此急需培育出抗病性、抗逆性强的牙解新品种，满足目前牙鲜养殖业的迫切需要。，我们开展了为此＾＾１下工作：１．牙鲜媛弧菌攻毒实验我们使用健康芽鲜混合群体进行攻毒实验，将牙辑分为对照组和处理组，对照９组腹腔注射生理盐水，处理组则将媛孤菌配成１０

6、ｄｌｉ／ｍｌ的菌悬液，用于牙解腹腔注射。将早期死ｔ的牙鲜视为輯弧菌易感个体，在注菌实验中始终存活的个体为抗病个体。２－－．牙鲜丝氨酸蛋白酶Ｉ］（ｓｅｒｉｎｅｒｏｔｅａｓｅ１１ＳＰＭ）基因ｐ，多态性的初步研究一、丝氨酸蛋白酶＇（ｓｅｒｉｎｅｐｒｏｔｅａｓｅ）是类蛋白水解酶，它是Ｗ丝氨酸为活性中巳。丝氨酸蛋白酶在生物体中起到了极其关键而又广泛的生理作用，并且具有广泛的研巧Ｗ及应用价值。本实验中我们利用重测序的方法，在牙解丝氨酸蛋白酶－ＮＰｓ）基因（八记／Ｍ１）ＣＤＳ中筛选出９个单核巧酸多

7、态性位点（Ｓ。同时，我们－扩增出八诏户１】２６０５ｂｐ的启动子序列，从健康的牙鲜混合家系中选出部分样本，筛选出２８个ＳＮＰ位点。对感染媛弧菌的抗病牙鲜个体和易感牙鲜个体进行了部分ＳＮＰ位点的分型。通过分析ＣＤＳ中ＳＮＰ位点在抗病个体和易感个体的分布情况，发现ＳＮＰ３６５Ａ／Ｇ位点在抗病个体中的ＡＧ基因型的基因频率是６０％，高＝－ＰＣＲ结－于易感个体中的４０％（尸０，Ｉ．００。ＲＴｑ果显示八记尸Ｉ在抗病个体中的相对表达量高于易感个体的相对表达量，尤其在腎脏中的差异性表达极显著＝－（ｐ０．００

8、０３）。上结果表明，丝氨酸蛋白酶Ｉｌ基因在牙钟对抗媛弧菌感染过程中发挥重要作用，该基因的ＳＮＰ３６５Ａ／Ｇ位点是与牙钟媛弧菌感染相关的候选位点，因此，该位点可能是牙砰在抵抗媛弧菌感染病害的选择育种方面潜在的标记。３．牙钟Ｃ型溶菌酶基因（ｌｙｓｏｚｙｍｅ）多态性的初步研究溶茜酶是在有机体中普遍存在的水解酶，它能够