烟草抗马铃薯y病毒mirna的筛选及相关mirna的功能分析

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1、分类号＾密级公巧ＵＤＣＷ２全曰制硕±专业学位研究生学位论文烟草抗马铃馨Ｙ病毒ｍｉＲＮＡ的筛选及相关ｍ瓜ＮＡ的功能分析作者姓名；詹琳琳指导教师：武晓云副教授郭玉双副妍究员专业学位名称：农业推广硕壬领域名称：植物保护植物病虫害综合防治研究方向：农业与食品科学学院、所在学院；动物科巧学院（筹）论文提交日期：２０１５年１２月２１日■，浙江农林大学－２０１５年１２月ｒ．■？．ＺｈｅｉａｎｇＡ狂ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔｊｙＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓｔｅ

2、ｒ繼ＳｃｒｅｅｎｉｎｆｏｒｍｉＲＮＡｏｆｔｏｂａｃｃｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｏｔａｔｏｖｉｒｕｓＹｇｐａｎｄａｎｄｆｕ田ｃｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｏｆｒｅｌｅｖａｎｔｍｉＲＮＡ－Ｃａｎｄｉｄａｔｅ：ＺｈａｎｇＬｉｎｌｉｎＡｄｖ－ｉｓｅｒ：ＷｕＸｉａｏｕｎＡｓｓｏｃｉａｔｅＰｒｏｆｅｓｓｏｒｙ，ｕ－Ａｓｓｏｃｉａ化Ｓｐｅｒｖｉｓｏｒ：ＧｕｏＹｕｓｈｕａ田ｇＡｓｓｏｃｉａｔｅＲｅｓｅａｒｃｈｅｒ，Ｓｅｃｉａｌｉｔ：ＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎｐｙＤａｔｅｏｆＳｕｂｍｉｓｓｉｏｎ：Ｄｅｃｅｍ

3、ｂｅｒ２１２０１５，Ｚｈｅｉａｎｇ乂＆ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔｊｙ＾ＬｉｎａｎＺｈｅｉａｎｒｏｖｉｎｃｅＰ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ，ｊｇｐ，独创巧声明＂本人声明，所呈交的学位论文，是受烟草抗马铃著Ｙ病毒相关ｍｉＲＮＡ的筛选与功能分＂析项目资助，在指导教师指导下，通过我的努为取得的成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中己经作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研巧成一果，也不包含在浙江农林大学或其他教育机构获得学位或证书而使用过的材料。与我同对本研巧做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意。如被查有严重侵犯他

4、人知识产权的仔为，由本人承担应有的责任。学位论文作者亲笔签名；２０１５．１２．２１：日期论文使用授权的说明本人完全了解浙江农林大学有关保留，，、使用学位论文的规定即学校有权送交论文的复巧件，可Ｗ采用影印允许论文被查阅和借阅：学校可＆公布论文的全部或部分内容、缩印或其他复制手段保存论文。，在保密＿年后解密可适用本授权书。□＿不保密，本学位论文属于不保密。口＂＂（请在方框内巧Ｖ）学位论文作者亲笔签名：：２０１５．１２．２１＿日期２０１５．１２．２１：日期：指导教师亲笔签名＿ｍ摘要一（ＰＶＹ），烟草是我国重要的经济

5、作物，马铃墓Ｙ病毒是烟草上的主要病害之近几年，，ＰＶＹ在我国烟草主要产区爆发成灾并且存在逐年加重的趋势。目前生产上对于ＰＶＹ的防治尚无有效的药剂，因此，培育抗ＰＶＹ的烟草品种是防治该病害一最为有效的办法，了解病毒与烟草相互作用的分子机理是解决迄。然而问题的关键。研巧表明，ｍｉｃｒｏＲＮＡｍｉＲＮＡ在调节植物对病毒的抗性方面具有重要作用，本文（）在探究ＰＶＹ侵染对植物内源ｍｉＲＮＡ表达的变化的基础上，探索是否可通过调控内源ｍ一ｉＲＮＡ基因的表达从而起到抗病毒作用，为烟草的病毒防治和抗病育种提供个新的思路。本研究获得的主要研究结果如下：１ＰＶＹＲＮＡ（ｓｍ

6、ａｌｌＲＮＡ，ｓＲＮＡ），．对侵染烟草样品及健康对照进行了小测序通过分析ＰＶＹ侵染后烟草内源ｍｉＲＮＡ表达谱的变化，表明ＰＶＹ能够显著影响烟草内源８１个ｍｉＲＮＡ表达发生变化，其中上调表达ｍｉＲＮＡ５７个，下调表达２１ｉ个，对表达差异的ｍＲＮＡ进行鞭基因预测。－ｍ－９６ｂ－－２．选择表达蟲著上调的烟草ｎｔａｉＲ１５６ｇ、ｎｔａｔｎｉＲ３、ｎｔａｍ化１６９ａ、打ｔａｍｉＲ６１４９ａ，－ｍ化６０１－－ｍ化显著下调的ｎｔａ９ａＷ及表达差异不显著的ｎｔａｍｉＲ１６８ａ、ｎｔａ１７２ｃ进行Ｎ一ｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交验证与测序及差异分析结果基本，杂交结果致。－

7、３ｔ３９ｔ－．筛选出ｎａｍｉＲ化作为本文的研巧对象，构建了ｎａｍ化３９化基因超量表达的－植物表达载体，通过农杆菌介导的遗传转化，将ｎｔａｎｉｉＲ３９化转入烟草栽培品种＂＂Ｋ３２６中，获得了转基因植株。将转基因植株自交至Ｔ２代，用于后期研究。４．对Ｔ２代转基因烟草未转基因植株作为对照进行ＰＶＹ的抗病性鉴定，结果表明，转基因烟草的发病延缓，症状较未转基因烟草明显减弱，证实烟草ｍｉＲ３９化具有抗ＰＶＹ侵染的功能。本研巧从ｍｉＲＮＡ的角度寻找ＰＶＹ的