bmscsepcs联合移植治疗兔股骨头坏死实验研究

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1、分类号民６８单位代码：１０１６０学号；２０１２２００７２？ｆ覆審转硕ｉ学位论文题目；ＢＭＳＣｓＥＰＣｓ／联合移植治疗兔股骨头坏死实验研究Ｓｔｕｄｙｏｆｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｏｆｃｏｍｂｉｎｅｄｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｒｏｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｓｗｉｔｈｂｏｎｅｐｇｍａｒｒｏｗｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌｓｆｏｒｆｅｍｏｒａｌｈｅａｄｎｅｃｒｏｓｉｓｉｎｒａｂｂｔｉｓ硏究生：於绍龙导师：刘丹平学科专业：骨科学２０

2、一１３３２０１４论文课题起止时间：年月年６月论文完成时间：２０１５年３月辽宁医学院研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含一为获得我校或其他教育机构巧学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。乏处一申请学位论文与资料若有不实，本人承担巧相关责任。如

3、、：日期论文作者签著：辽宁医学院研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解巧宁医学院有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属迂宁医学院。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为巧宁医学院，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为巧宁医学院。学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和猶盘，允许论文被查＾阅和借阅！乂公。学校可布学位论文的全部或部分内容（保密巧容除外），从采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签遂：

4、指导教师签名目录一、摘要中文论著摘要……………………………………………………………………1英文论著摘要……………………………………………………………………5二、英文缩略语………………………………………………………………………8三、论文正文前言………………………………………………………………………………9实验材料与方法…………………………………………………………………10实验结果…………………………………………………………………………20讨论………………………………………………………………………………3

5、0结论………………………………………………………………………………32四、本研究创新性的在自我评价……………………………………………………33五、参考文献…………………………………………………………………………34六、附录综述………………………………………………………………………………36在校期间科研成绩………………………………………………………………45致谢………………………………………………………………………………46个人简介…………………………………………………………………………47·中文论著摘要·B

6、MSCs/EPCs联合移植治疗兔股骨头坏死实验研究目的检测骨髓来源内皮祖细胞与骨髓基质细胞联合移植到股骨头缺血坏死部位促进坏死区局部成骨和成血管能力。方法1、密度梯度离心法分离培养兔骨髓基质细胞并进行鉴定。2、采用相同方法获取兔内皮祖细胞并进行鉴定。3、共培养的兔骨髓基质细胞与内皮祖细胞之间最佳比例采用碱性磷酸酶活性检测以确定。4、Real-TimePCR检测细胞成骨及成血管相关基因的表达。5、采用激素方法构建兔ANFH模型并进行检测。6、实验分4组：A组：空白对照B组：单独植入骨髓基质细胞悬液C组：单独植

7、入内皮祖细胞细胞悬液D组：植入骨髓基质细胞和内皮祖细胞混合的细胞悬液7、移植用细胞悬液的制备。8、根据组别将不同种类细胞移植到兔ANFH部位。9、股骨头坏死区域检测。(1)HE染色检测植入细胞后ANFH修复情况(2)免疫组化染色检测植入细胞后ANFH模型BMP-2表达(3)CD34免疫组化检测植入细胞后ANFH模型新生血管1结果1、兔骨髓基质细胞鉴定（1）镜下可见刚培养1d的细胞由于贴壁数目较少而呈现出圆形，细胞的体积较小。6d后可以观察到大部分细胞已经贴壁，细胞形态由之前的圆形变为梭形。接种9d后可以观察

8、到细胞的数目明显较之前增多，细胞之间排列规律并且有融合的趋势。传代后的细胞形态更加单一，可见细胞铺满瓶底，旋涡状融合生长，排列有规则。（2）HE染色镜下可见，细胞出现长的梭型，生长旺盛,可见有核分裂出现。（3）第21d进行茜素红染色，可见骨髓基质细胞聚集，形成明显钙结节结构。（4）流式细胞仪结果显示，粘附分子CD44（97.85±1.56）%和受体分子CD90（96.83±1.83）%在骨髓基质细胞中高表达。而造