缺氧对人来源肌腱干细胞及脂肪间充质干细胞自我更新及分化的影响

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1、温州医科大学硕士学位论文全日制研究生学位论文评阅稿封面格式分类号：（R6）单位代码：10343学号：（151002455）硕士学位论文论文题目:缺氧对人来源肌腱干细胞及脂肪间充质干细胞自我更新及分化的影响研究生姓名：林立相学科专业：骨外科类型：专业型指导教师：郭晓山二O一八年五月1温州医科大学硕士学位论文论文题目：缺氧对人来源肌腱干细胞及脂肪间充质干细胞自我更新及分化的影响答辩委员会主席：顾立强答辩委员会成员：陈华闫合德论文答辩日期：二零一八年五月2温州医科大学硕士学位论文目录一、英文缩略词中英

2、文对照表………………………………………4二、论文摘要中文摘要（关键词）……………………………………………5英文摘要（关键词）……………………………………………6三、论文正文前言………………………………………………………………8材料与方法………………………………………………………10结果………………………………………………………………13分析与讨论………………………………………………………18全文小结…………………………………………………………20参考文献………………………………………………………

3、…20四、附录………………………………………………………………23五、致谢………………………………………………………………24六、综述及参考文献…………………………………………………25七、学位论文独创性声明……………………………………………353温州医科大学硕士学位论文一、英文缩略词中英文对照表英文缩写英文全称中文全称ADMSCsAdiposederivedmesenchymal脂肪间充质细胞stemcellshTSCshumantendonstemcells人来源肌腱源干细胞qRT-PCRQ

4、uantitativeReal-timePCR实时荧光定量PCRTrizolTotalRNAextractionreagent总RNA抽提试剂NSNuclearstemcellfactor核干细胞因子GAPDHglyceraldehyde-3-phosphate甘油醛-3-磷酸脱氢酶dehydrogenasePBSPhosphateBufferedSaline磷酸盐缓冲液FBSFetalBovineSerum胎牛血清TBStriethanolaminebuffered三乙醇胺缓冲液salineC

5、OL1TypeIcollagenI型胶原蛋白COL3TypeIIIcollagenIII型胶原蛋白TNMDTenomodulin腱调蛋白THBS4RecombinantThrombospondin4血小板反应蛋白4GAGglycosaminoglycan糖胺聚糖注：按字母顺序排列4温州医科大学硕士学位论文缺氧对人来源肌腱干细胞及脂肪间充质干细胞自我更新及分化的影响中文摘要目的：肌腱损伤修复的机制导致了临床上很多肌腱断裂和肌腱病的患者预后不佳，是临床上的难题。近年来再生医学不断发展，组织工程技术受

6、到很多学者的关注，似乎是治疗肌腱损伤的一个新突破口。体外诱导种子细胞向特定组织类型分化的最佳条件是是近年来研究的热点，有关肌腱源干细胞和脂肪间充质干细胞逐渐进入学者的视野，但目前有关低氧这一条件对干细胞分化影响的研究十分有限。本研究的目的是探讨在不同程度缺氧状态下对人来源肌腱干细胞（TDCs）及脂肪间质干细（ADMSCs）自我增殖能力和分化潜能的影响。方法：人类肌腱干细胞从冈上肌腱捐赠者获取。集落形成和细胞增殖试验来观察对照组和实验组的样本细胞数目和体积大小，进而评估样本干细胞的自我增殖程度。荧

7、光定量PCR与蛋白印迹分析技术用于检测样本干细胞的干细胞性关联基因的表达程度和肌腱细胞相关蛋白的表达，从而评估样本细胞的自我更新能力和干细胞性。人脂肪间充质干细胞是从Cyagen生物技术公司购买，原代肌腱细胞取自成年雌性S-D大鼠的跟腱。分别在常氧（20％O2）和低氧（2％O2）下使用ADMSCs与跟腱细胞共培养，设置单纯ADMSCs培养组为对照组。通过逆转录PCR，蛋白印迹和免疫组化等分析法检测ADMSCs向肌腱细胞分化程度。结果：我们发现在5%的氧浓度的细胞培养条件下对比其他三组氧浓度干细胞

8、具有更大的自我增殖程度，其培养后的集成细胞群表现出更大的细胞直径与克隆细胞数量。进行干细胞种植后分别置于5%、10%和20%的氧浓度环境下，细胞均开始增殖。在5%的氧浓度下的干细胞增殖数量明显高于其他氧浓度；然而，过低的氧浓度又会抑制肌腱干细胞的增殖，在0.5%浓度条件下的样本干细胞的自我更新能力受到抑制。间接细胞具有共培养增强了ADMSCs向肌腱细胞的分化能力的作用，此外，低氧进一步增强共培养条件下ADMSCs的向肌腱细胞定向分化的能力。结论：缺氧状态相比于常氧条件培养可以增强人肌腱干细胞的自