基于mapk信号通路的叶黄素抗肝癌hepg2细胞增殖效应研究

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterAnti-hepatomaHepG2CellsEffectofLuteinMediatedbyMAPKSignalingPathwayByXiaozheChenSupervisor：Prof．LeiFuMingchenWangPharmacology一一SchoolofPharmaceuticalScienceMay，2013本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引

2、用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发

3、表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：年月日岭明士尸陆．=¨J仓泵摘要背景与目的：原发性肝癌(primaryliverCRllCer，PLC)是常见的消化道恶性肿瘤之一，其中90％是肝细胞肝癌(hepatocellularcarcmoma，HCC)。随着慢性肝炎、肝硬化发生率的升高，肝癌的发病率也在不断的上升，我国是世界上肝癌发病率和死亡率最高的国家之一，发病人数约占全球的55％，死亡率占恶性肿瘤的第二位。肝癌的发生和发展是一个多因素，

4、多步骤，多基因相互作用演变的结果，且发病隐匿，发病迅速，患者生存周期短。目前肝癌的主要治疗方法有手术切除，化疗和放疗等综合治疗，大部分肝癌患者确诊时已是晚期，不适合手术切除，即使手术切除也易复发，放疗和化疗会给人体造成一定的毒副作用和产生化疗耐药性。因此，寻找一种高效低毒的天然植物药物对肝癌的治疗具有重要的临床意义。叶黄素(Lutein)主要存在于蔬菜，水果等膳食中的一种含氧类胡萝卜素，在抗氧化，预防白内障，黄斑变性，延缓动脉硬化，抗肿瘤等方面有重要的作用，本实验室前期研究已证明一定浓度的叶黄素对食管癌，胃癌及乳腺癌细胞有显著的增殖

5、抑制作用。本实验旨在研究叶黄素对人肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用并初步探讨其分子机制。方法：本论文采用SRB法绘制人肝癌HepG2细胞8d的生长曲线；SRB法检测不同浓度的叶黄素对HepG2细胞的增殖抑制作用；倒置显微镜下观察叶黄素对HepG2细胞形态学的影响；流式细胞仪检测药物对HepG2细胞周期分布的影响；Hoechst33342／PI荧光染色法和流式细胞仪AnnexinV-FITC／PI双染法分别定性和定量检测叶黄素对HepG2细胞凋亡的影响；Westernblot检测叶黄素处理HepG2细胞24h后，细胞内ERKl／2和p

6、38蛋白磷酸化的表达情况；RT-PCR检测细胞内AP．1mRNA、p53mRNA、caSpaSe．3mRNA的表达情况；SP免疫细胞化学法检测叶黄素处理HepG2细胞后Bax、Bcl．2、caspaSe．3蛋白的表达变化。结果：SRB检测结果显示，叶黄素能显著抑制HepG2细胞增殖，且有时间和剂量依赖性(P

7、、74．84％；流式细胞仪检测细胞周期结果显示，叶黄素将HepG2细胞周期阻滞于G0／G1期；Hoechst33342／PI双染摘要法检测细胞凋亡情况，对照组显示低蓝光和低红光，随着药物浓度的逐渐增加，显示高蓝光和高红光即凋亡细胞数目逐渐增加，定性地说明叶黄素能够诱导HepG2细胞凋亡；流式细胞仪AnnexinV-FITC／PI双染法检测细胞凋亡结果显示，对照组、80、160mg／L叶黄素组早期细胞凋亡的比率分别为0．12％、33．59％、21．11％，晚期细胞凋亡的比率分别为0．37％、22．50％、47．19％，定量地说明了叶黄

8、素能诱导HepG2细胞凋亡；Westernblot检测结果表明，叶黄素作用HepG2细胞24h后，ERKl／2蛋白的磷酸化水平下调，p38蛋白的磷酸化水平上调，且有浓度依赖性；RT-PCR检测结果显示，叶黄素作用HepG2细胞24h后