pi-3kakt信号通路在双氢睾酮抗aβ25-35诱导c6细胞凋亡中作用研究

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1、万方数据复旦大学硕士学位论文(专业学位)PI一3K／Akt信号通路在双氢睾酮抗Ap25-35诱导C6细胞凋亡中作用研究院专姓系：复旦大学附属金山医院业：神经病学名：宾乐林指导教师：祖衡兵导师组成员：化范例邬军锋张建峰副教授副主任医师主治医师万方数据复旦大学硕士学位论文目录

2、JIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIY2703546英文缩略词表(Abbreviation)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一2Abstract。．．．⋯．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．．⋯⋯．．．．．．．．

3、．．．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．．．．⋯．⋯．．．．．．．．．．6前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．19结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．29讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．4l参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．56致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57万方数据复旦大学硕士学位论文英文缩略词表(Abbreviation)万方数据复旦大学硕士学位论文PI．3K／Akt信号通路在双氢睾酮抗A[325—35诱导C6细胞凋亡中作用研究中文摘要研究背景阿尔茨海默病(Alzheimerdisease，AD)是人类最常见的痴呆类型之一，它可以引起进行性的记忆损害、认知功能下降和行为异常。伴随着人口老龄化，AD日益成为威胁人类健康的主要疾病之一。迄今为止，AD仍然缺乏的有效预

5、防与治疗手段。临床流行病学资料提示，伴随着衰老过程，年龄相关性的血清雄激素水平下降与AD的发病率呈现正相关性变化。补充雄激素可以明显降低AD的发病风险。越来越多的资料提示，双氢睾酮(Dihydrotestosterone，DHT)在AD的预防与治疗中具有广泛的神经生物学作用，有助于抑制AD病理损伤，修复损伤的神经元与突触可塑性修复等神经保护效应。凶此，雄激素作为预防与治疗AD的潜在药物越米越多引起国内外的广泛关注。进一步阐明雄激素的神经保护作用及其分子作用机制，可能为我们探索预防与治疗AD的新方法提供非常重要的理论与临床依据。研究目的为了进一步阐明雄激素的神经保护作用

6、及PI一3K／Akt信号通路在其神经保护作用中的潜在作用。本研究采用C6细胞作为体外神经胶质细胞研究模型，利用Ap25．35诱发C6细胞凋亡活动，观察双氢睾酮(DHT)对Ap25-35诱发C6细胞凋亡活动的影响，并探讨其u'『能的神经保护作用分子机制。研究方法第一部分通过雄激素受体(AR)间接免疫荧光染色，在倒置荧光显微镜及激光共聚焦显微镜下观察C6细胞上AR的表达情况。第二部分对C6细胞使用不同浓度和不同时问梯度的DHT处理后，利用WesternBlotting检测法观察DHT对C6细胞Akt激酶磷酸化激活的效应；并进一步加用PI一3K抑制剂LY294002研究其对

7、DHT磷酸化激活C6细胞上Akt激酶表达的影2万方数据复旦大学硕士学位论文响。第三部分利用不同浓度的梯度AB25_35处理培养的C6细胞后，通过AnnexinV．一FITC／PI双染流式细胞术定量观察AB25-35诱导的c6细胞发生凋亡活动的情况；加用DHT后，通过流式细胞术和Hochest33342染核分别定量和定性检测观察DHT抗Ap25-35诱导的C6细胞凋亡活动的影响；利用PI一3K抑制剂(LY294002)处理C6细胞后，通过AnnexinV．．FITC／PI双染流式细胞术，进一步观察PI．3K／Akt信号通路在DHT抗A1325．35诱导的C6细胞凋亡活动

8、的作用。第四部分DHT和Ap25．35干预c6细胞后，通过WB检测法分别观察DHT和Ap25_35对C6细胞凋亡蛋白相关蛋白Seladin—l、Bax、Bcl。xl表达的调控作用，进一步阐明DHT抗AB25-35诱导c6细胞发生凋亡活动保护作用的潜在分子机制。研究结果第一部分在倒置荧光显微镜及激光共聚焦显微镜观察后发现，间接免疫荧光染色后的雄激素受体(AR)在离体培养的C6细胞上存在广泛、高水平表达，细胞膜、胞浆上均有明显表达。上述实验结果提示，培养的C6细胞存在高水平的膜AR、胞浆AR表达。第二部分WesternBlotting检测发现，C6细胞在