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1、云南植物研究2005,27(2):211～216ActaBotanicaYunnanica植物中超氧阴离子自由基测定方法的改进XXX李忠光,龚 明(云南师范大学生命科学学院,云南昆明 650092)摘要:通过对植物超氧阴离子自由基测定反应中动力学曲线的分析,确定了最佳的反应介质、反应参数和羟胺浓度,以三氯甲烷代替乙醚作为植物色素萃取试剂,克服了植物超氧阴离子测定中存在的诸多问题,提高了测定结果的准确性、重复性和可比性。关键词:植物;超氧阴离子自由基;测定方法中图分类号:Q945文献标识码:A文章编号:0253-
2、2700(2005)02-0211-06ImprovementofMeasurementMethodforSuperoxideAnionRadicalinPlant33LIZhong2Guang,GONGMing(SchoolofLifeSciences,YunnanNormalUniversity,Kunming650092,China)Abstract:Thispaperanalysedkineticscurveofsuperoxideanionradicalreactingwithhydroxylamin
3、e.Optimumreactionmedium,reactionparametersandhydroxylamineconcentrationwereconfirmed.There2sultindicatedthatchemicalreagentchloroforminsteadofethyletherasextractionreagentofplantpigment,overcomedsomeproblemsofmeasurementmethodforsuperoxideanionradicalinplant
4、,andenhancedtheaccuracy,reproducibilityandcomparability.Keywords:Plant;Superoxideanionradical;Measurementmethod植物细胞在其生命活动过程中,由于叶绿体、线粒体和质膜上每时每刻都发生着电子传递过程中电子的泄露,因而不可避免地会产生大量的活性氧,如过氧化氢(H2O2)、超.-.氧阴离子自由基(O2)、羟自由基(OH)等(李忠光等,2003)。近几年的研究表明,活性氧在植物对环境胁迫的信号感受、传导与适应过程
5、中起重要作用(李忠光和龚明,2003)。因此,准确测定活性氧浓度无疑在植物抗逆性研究中起着非常重要的作用。.-常见的植物O2测定方法有化学发光法、NBT法、细胞色素法、邻苯三酚法、肾上腺素法和羟胺氧化法(王爱国和罗广华,1990;ElstnerandHeupel,1976)。但由于干扰因素X基金项目:国家自然科学基金(30460016)、云南省自然科学基金(2004C0031M)、国际合作计划(2002GH06)及教育部高校优秀青年教师教学科研奖励计划(2001年度)XX通讯作者:Authorforcorres
6、pondence.E-mail:gongming@public1km1yn1cn收稿日期:2004-09-08,2004-12-02接受发表作者简介:李忠光(1971-)男,彝族,实验师,云南省永德县人,主要从事植物逆境生物学研究。E-mail:Zhongguang—li@1631com 电话:0871-5517394©1995-2005TsinghuaTongfangOpticalDiscCo.,Ltd.Allrightsreserved.2 云 南 植 物 研 究
7、 1227卷颇多,实际应用时困难不少。羟胺氧化法测定植物超氧阴离子自由基具有灵敏度高,专一性较好,药剂价廉等特点(王爱国和罗广华,1990;ElstnerandHeupel,1976)。但是,这一方法在实际应用中存在许多问题:首先是色素的干扰;其次是以正丁醇为萃取液有时与反应介质分层不明显,而以乙醚为萃取液,则反应介质位于下层,给比色带来不便;第三-是酸度对显色反应的影响、内源NO2的干扰、羟胺的自氧化以及反应介质浑浊等,针对.-这些问题,我们作了以下修改,以适合植物O2的准确测定。1材料和方法111
8、 植物材料的培养挑选饱满的玉米(Zeamays)品种大黄的种子,以011%HgCl2消毒10min后,漂洗干净,于2615℃下吸涨12h,播于垫有6层湿润滤纸的带盖白磁盘(24cm×16cm)中,于2615℃下黑暗中萌发60h。随-2-1后,移植于腐植土中,同样的温度下于人工气候箱中继续培养,每天于100μmol·m·s的光强下光照14h,培养期间定期补充水分。112酸对显色反应的影响
