肌苷对损伤大鼠嗜铬细胞瘤（pc12）细胞的神经保护及突起生长作用

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1、第四军医大学硕士学位论文肌苷对损伤大鼠嗜铬细胞瘤（PC12）细胞的神经保护及突起生长作用姓名：史明申请学位级别：硕士专业：神经生物学指导教师：鞠躬;游思维20020101第叫军医人学硕jj毕业论文肌苷对损伤大鼠嗜铬细胞瘤(PCI2)细胞的神经保护及突起生长作用研究生：史明指导老师：鞠躬(教授)辅导老师：游思维(教授)第四军医大学神经科学研究所西安710032摘要中枢神经系统(CemerNeⅣousSystem，CNS)损伤的后果往往是灾难性的，原因是伤后往往形成继发性神经元死亡以及CNs内的环境不利于损伤神经纤维的生长和缺乏各种促进生长和再生的营养因

2、子。因此，探索有效的针对CNS损伤的药物一直是科学家及医疗工作者努力的方向。肌苷是腺嘌呤核苷酸分解代谢的中间产物之一，临床上长期作为能量合剂用于各种疾病的辅助治疗。近期研究发现，肌苷在神经系统中也发挥着重要的营养作用。本实验旨在研究不同浓度肌苷对不同伤害性刺激损伤的大鼠嗜铬细胞瘤(RatPheochromocvtoma，PCI2)细胞(一种通用的神经细胞模型)的神经保护和突起生长作用。在本试验的第一部分中，我们利用高浓度硫酸锌(ZnicsuIfate，zns04)对PCI2细胞造成化学性损伤后加入不同浓度肌苷，观察PCI2细胞的形态学改变并对死亡细胞

3、进行计数。结果发现不同浓度肌苷可以在一定程度上减少高浓度znsO。造成的细胞死亡，这种效应呈现出一定第lJU车医人学坝l毕业论上的浓度依赖性。由于Pcl2细胞中缺乏核苷磷酸化酶(PurineNucleosidePhosphorylase．PNP)，所以不能催化肌苷通过能量合成的途径来补充细胞损伤时所造成的能量匮乏，因此我们提出肌苷的这种神经保护作用可能是通过核蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(Poly(ADP．ribose)P01ymerase．PARP)来实现的。在试验的第二部分，我们利用弯头吸管在培养液中不断吹打的方法对Pcl2细胞造成一种机械的物理损

4、伤，施加不同浓度肌苷后，11在不同的时恻点观察细胞的形态学变化并对细胞进行分类计数：2)对细胞进行免疫细胞化学染色，研究肌苷对生长相关蛋白(GroMhAssociatedProtein．43，GAP．43)和磷酸化促有丝分裂原相关蛋白激酶(phospho—MitogenAssociatedProteinKinase，pMAPK)表达的影响。结果显示：不同浓度肌苷可使具有长突起及分枝突起的Pcl2细胞数目显著增加：明显提高GAP．43和口MAPK免疫细胞化学染色的阳性率。因此肌苷促进突起生长的作用机理可能是通过激活细胞内MAPK来实现的。通过以上试验我

5、们证实了肌苷对损伤神经细胞的重要作用：对高浓度硫酸锌诱发的PCI2细胞损伤有依赖于剂量的保护作用，可降低其造成的细胞死亡；促进机械损伤PCI2细胞突起的生长，并能刺激突起发出分枝；促进生长相关蛋白GAP．43的合成表达。关键词：肌苷，PCI2细胞，硫酸锌，神经保护，突起生长，生长相关蛋白，体外培养Ef．fbctsofInosineonNeuronaIProtectionandNeuriteoutgrowthofRatPheochromocytoma(PCI2)CellsPost2霹duate：ShiMingSupervisor：Prof．JuGong

6、ProfYouSi—Wei(Inst“uteofNeurosciencesResearch．TheFounhM⋯taryMedicalUniVersity，Xi’an710032PRChina)ABSTRACTCenterNervousS”tem(CNS)injuriesoRenleadcocaI锄itousresults，mainlyduetosecondarycelldeath，adverseenvirorunentandlackofneurotrophicfactorswhichcanbenefitregenerationofⅫurednerv

7、ous肋ers．Therefore，toexplore血eeffectiVemeasurestotreatmecNsinjuryisa10ngte玎neffbrtofneuroscientistsInosine，oneofthecacab01icproductsofpurinenucleotjde，hasIongbeenciinicallyusedtosuppIementa“yn

8、eatava—etyofdiseasesduetoitsinvoIvementinenergysynthesisRecently，ithasbeenreponedthati

9、nosinealsoplaysanimportallttrophicr01eintheCNS．Thisstu