两种植物病毒编码的rna沉默抑制子在寄主体内的功能研究

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1、匾叠撞堑痘耋编码趁．趔△泌地剑王查万方数据壹圭佳凼丝功篚婴塞⑧论文作者签名：墓狸兰指导教师签名：论文评阅人1：塑囱隆名迁室论文评阅人2：塑囱隐名证室论文评阅人3：巫囱隐名证室论文评阅人4：塑囱隐名证室论文评阅人5：塑囱隐名证室答辩委员会主席：塞区堕教援逝堑太堂壅些皇生塑撞盔堂瞳委员l：吐蓥堡教援逝江太堂盛些星生物撞本堂院委员2：里忠堡教援浙江太堂塞些星生物．拉苤堂院委员3：陶题垄班究虽堑江省盘些型堂研究院委员4：隆剑壬硒究虽堑江省塞些型堂研究陡委员5：瑟垣本研究员浙江省壅些秘堂研究陡答辩日期：2Q!三生12旦13目万方数据浙江大学博士学位论文浙

2、江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝望盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做舭顺躺酰敝悱了嗍僦肼标黼。燃荆学位论文作者签名：要移乒签字蹶舢哞乡月77日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝’江盘堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权—堂鎏盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进

3、行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：雾裾少签字日期：d口／垆年≥月刁日导师签名1争叫签字日期：矽l绰3，月’7Et万方数据浙江大学博士学位论文摘要RNA沉默眦silencing)是植物抵抗病毒侵染的有效途径，它通过降解病毒基因组起到抑制病毒复制和侵染的作用．然而，几乎所有植物病毒均能编码RNA沉默抑制子(viraasuppressorsofRNAsilencing，VSR)来抵抗寄主的这种防御反应，达到顺利侵染、复制并系统扩散的目的。不同病毒来源的VSR抑制

4、RNA沉默的机制不同，如番茄丛矮病毒(romat06埘砂stuntvirus，TBSV)编码的p19，可与siRNA结合，阻止siRNA进入沉默诱导复合体(RNA-jnduccdsilencingcomplex，RISC)；芜菁黄花叶病毒(阶印yellowmosaicvirus，TYMV)编码的p69可结合RNA沉默过程中的dsRNA，抑制RNA沉默的发生；黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaicvirus，CMV)编码的2b与AGO(Argonaute)相互作用，抑制植物RNA沉默．VSR在植物体内的表达，有时也会对植物内源siRNA和mi

5、RNA途径、以及mRNA表达谱造成影响，导致植株生长、发育异常；但有些VSR并不造成这些影响。本文针对马铃薯x病毒(PotatovirusxPVX)编码的沉默抑制子p25和水稻条纹病毒俾／cestripevirus，RSV)编码的沉默抑制子p3开展深入研究，揭示了植物体通过抑制p25功能抗PVX侵染的一条新途径：明确了RSVp3蛋白通过诱导水稻体内抗性相关基因表达起到提高水稻对病原物抗性的作用．p25是PVX编码的一个多功能蛋白，同时具有运动功能和沉默抑制子功能。作为运动蛋白，p25与其它两个TGB蛋白——TGBp2和TOBp3协助PVX进行细

6、胞间运动和系统运动；作为病毒RNA沉默抑制子，p25通过与RNA沉默机制核心蛋白AGO互作，阻止其形成RNA诱导沉默复合体结合(RISC)，从而抑制RNA沉默机制。我们通过酵母双杂交(Yeasttwohybride，Y2H)系统从本氏烟(Nicotianabenthamiana)leDNA文库中筛选分离到一个与p25互作的丝氨酸类蛋白酶抑制剂(Proteinaseinhibitor,PI)蛋白，命名为NbPl．利用双分子荧光互补(Biomolecularfluorescencecomplementary,BiFC)技术在体内验证了两者的互作。研

7、究发现，通过VIGS系统沉默NbPI，会导致PVX症状加强，病毒RNAs积累量增多；相反，植株过表达NbPI则表现出对PVX侵染的抗性，表现在症状显著减轻，病毒RNAs积累量显万方数据浙江大学博士学位论文著下降。进一步研究发现，NbPI的瞬时表达会轻微抑制p25的沉默抑制子功能，但显著抑制其运动功能。研究还发现，PVX侵染会导致本氏烟体内NbPI基因表达下调。基于此，我们认为NbPI通过抑制p25的功能参与了寄主抵抗PVX侵染过程，而PVX则可能通过抑制NbPI表达来对抗这条抗性途径。RSV是纤细病毒属病毒，其基因组包括四条单链RNA，除RNA

8、l反义编码RNA依赖RNA聚合酶(RNAdependentRNApolymerase，RdRp)外，其它三条链都以双义编码策略表达，分别含有两个不重叠