胶原蛋白的提取工艺、质量分析研究及其在生物膜材料中的应用

《胶原蛋白的提取工艺、质量分析研究及其在生物膜材料中的应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、河北医科大学硕士学位论文胶原蛋白的提取工艺、质量分析研究及其在生物膜材料中的应用姓名：杜力申请学位级别：硕士专业：药物分析学指导教师：牛长群20080301河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承

2、担相应的法律责任。僦虢拗⋯名辎嚣≯研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：导师签名．斗萨群渺万{年y月日中文摘要胶原蛋白的提取工艺、质量分析研究及其在生物膜材料中的应用摘要目的：胶原蛋白作为天然动物生物质资源，在生物材料等领域的研究和应用深受国内外关注。胶原蛋白显著的低免疫原性、生物相容性、可降解性，具有止血功能，并且

3、在生物体内容易被吸收，亲水性强、无毒安全性好，是作为生物材料的优势，目前特别是在组织工程材料方面胶原蛋白得到了广泛的应用研究。本文在胶原蛋白的提取、质量分析方面及其生物膜方面的应用进行了一些创新性研究。方法：1．胶原蛋白提取工艺的研究：本研究以牛跟键为制备原料，比较酸溶法、酶解法、中性盐溶液法三种粗提方法，选择得率和纯度都较高的方法为最佳粗提法，结合高效液相色谱进行胶原蛋白的分离纯化。2．胶原蛋白的质量的研究通过胶原蛋白理化性质研究：SDS-PAGE测定：紫外最大吸收测定；氨基酸测定；色谱分析纯度

4、，对胶原蛋白的质量进行控制。通过小鼠急性毒性试脸、豚鼠致敏试验、细胞毒性试验对自制胶原蛋白进行整体水平和细胞水平的生物安全性评价。3．对胶原生物膜材料应用的研究用提取的胶原样品冷冻干燥成膜，根据生物膜材料的特性要求，本文选用了具有独特的生理、药理活性的单宁酸为中文摘要交联剂。通过考察单宁吸收量和胶原膜稳定性之间的关系、单宁酸交联的胶原膜的热稳定性和抗酶解能力来评价单宁酸交联膜。结果：1胶原蛋白提取工艺的研究：在酸溶法、酶解法、中性盐溶液法三种粗提方法中，选择得率和纯度都较高的方法酶解法；结合高效液

5、相色谱进行胶原蛋白的分离纯化得到的I型胶原蛋白与I型胶原蛋白标准品的保留时间一致，样品的保留时间是14．348，标准品的保留时间是14．251。2胶原蛋白的质量分析的研究样品在223nln处有紫外最大吸收值：含有十八种氨基酸，氨基酸总量在90％以上；样品的蛋白质浓度为1．03mg／ml；SDS．PAGE测定I型胶原蛋白由Ⅸ、p、1，三条链组成；色谱分析纯度约为100％。通过小鼠急性毒性试脸、豚鼠致敏试验、细胞毒性试验对自制胶原蛋白进行整体水平和细胞水平的生物安全性评价，观察期内，小鼠未见异常毒性反

6、应：豚鼠注射点无红斑及水肿情况：细胞毒性小于I级，结果证明本方法制备的胶原蛋白无毒副作用。3胶原生物膜材料的研究3．1胶原经交联和干燥后，单宁酸的吸收量达到15~34％。3．2，随着单宁酸被胶原膜的吸收量增加，单宁酸在胶原膜内被结合的量也有所增加，引起了Tm的提高。3．3未交联胶原膜、戊二醛交联胶原膜、和单宁酸交联胶原膜三种样品，各切成均匀小样4片。按10U／mg胶原计算酶的用量，将小样置于该胰蛋白酶清液中处理消化。消化时问中文摘要为4h，期间注意变化，每个样品共取样四次，取样后用大量蒸馏水仔细漂

7、洗，停止酶降解反应。酶降解后测定胶原膜机械性能变化。可以看出，未交联胶原膜降解迅速，接近40min内即丧失90％左右的抗张强度；戊二醛交联胶原膜在40min左右还保留着50％的抗张强度，临近4h酶解过程结束时，抗张强度明显降低；而单宁酸交联的胶原膜变化不大。结论：1以牛跟键为材料，选择得率和纯度都较高的酶解法为最佳粗提法，结合高效液相色谱制备I型胶原蛋白。2通过紫外光谱扫描、氨基酸组成及含量测定、蛋白质浓度、SDS．PAGE和RP-HPLC分析对所提取的I型胶原蛋白进行理化性质鉴定，结果证明上述制

8、备方法可得到纯度较高的I型胶原蛋白。体内外安全性实验结果表明本方法制备的I型胶原蛋白无毒副作用。3胶原生物膜材料的研究3．1胶原膜对单宁酸的吸收量达到15．34％。单宁酸溶液浓度越高，胶原膜吸收的单宁酸就越多。3．2在交联过程中，吸收量与Tm变化基本成正比关系。胶原膜对单宁酸的吸收量在34％时，Tm可达到81℃，这时，单宁酸浓度为12．5％，此浓度为最佳浓度。3．3在胰蛋白酶溶液中，单宁酸交联胶原膜基本不发生降解，生物稳定性好，作为生物材料有着一定的应用意义。戊二醛交联的胶原膜稳定