马铃薯甲虫热激蛋白基因hsp60、hsp70和hsp90的克隆及温度胁迫下的表达

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1、分类号：密级：UDC：编号：硕士学位论文马铃薯甲虫热激蛋白基因hsp60、hsp70和hsp90的克隆及温度胁迫下的表达CloningofHeatShockProteinGenes(hsp60、hsp70andhsp90)inLeptinotarsadecemlineata(Coleoptera:Chrysomelidae)anditsexpressionundertemperaturestress指导教师:郭青云研究员程登发研究员申请人姓名:蒋健学科专业名称:作物栽培学与耕作学研究方向:昆虫分子生

2、物学学院（系、部）:青海大学研究生院年月QinghaiUniversityMasterDissertationCloningofHeatShockProteinGenes(hsp60、hsp70andhsp90)inLeptinotarsadecemlineata(Coleoptera:Chrysomelidae)anditsexpressionundertemperaturestressSupervisor:Prof.QingyunguoProf.DengfaChengCandidate:Jian

3、gjianAcademicMajorApplidedfor:CropCultivationandFarmingSystemSpecificMajor:InsectMolecularBiologyCollege(Department):GraduateschoolofQinghaiUniversityJune独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做

4、出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权青海大学大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本论文属于：保密□不保密□（请在相应方框内打“√”），在_____年解密后适用本授权书。学

5、位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日青海大学硕士学位论文摘要摘要马铃薯甲虫Leptinotarsadecemlineata(Say)是一种抗逆性极强的国际性检疫害虫，对温度胁迫具有很强的适应性。为了明确马铃薯甲虫温度胁迫适应性的分子生态机制，本研究采用生物信息学手段结合RT-PCR和RACE技术，对马铃薯甲虫HSP60、HSP70和HSP90基因的全长cDNA序列进行了克隆与序列分析，并利用实时荧光定量PCR技术检测了温度胁迫后Ld-hsp60和Ld-hsp90的相对表达量。主要研

6、究结果如下：首次在马铃薯甲虫中成功克隆得到HSP90和HSP60基因的全长cDNA，分别命名为Ld-hsp90、Ld-hsp60。cDNA序列全长分别为2489bp、2234bp，其5’端非翻译区（UTR）分别长113bp、101bp，3’UTR长度分别为216bp、402bp。完整的开放阅读框长度分别为2160bp、1731bp，分别编码719、576个氨基酸。氨基酸序列分别具有HSP90、HSP60家族典型的高度保守的特征序列。获得了3个HSP70基因的全长cDNA序列，分别为2199bp的Ld

7、-hsp70a、2397bp的Ld-hsp70b和2482bp的Ld-hsp70c。其5’UTR分别长92bp、132bp、289bp，3’UTR长度分别为160bp、291bp、203bp。完整的开放阅读框长度分别为1947bp、1974bp、1890bp，分别编码648、657和629个氨基酸。三者的氨基酸序列一致性为71.50%。氨基酸序列均含有HSP70家族典型的高度保守的特征序列。本试验将马铃薯甲虫成虫在高温（38℃、44℃）热激处理1h后，Ld-hsp90的表达量均显著高于对照组（25℃

8、），而Ld-hsp60的表达量与对照相比均无显著性差异；低温（-10℃、0℃）处理1h后，Ld-hsp90与Ld-hsp60的表达量与对照组相比均无显著性差异。综上所述推测，Ld-hsp90的高表达在马铃薯甲虫抗高温中起着重要的作用；温度胁迫不能诱导马铃薯甲虫Ld-hsp60的上调表达。关键词：马铃薯甲虫热激蛋白基因克隆生物信息学分析实时荧光定量PCRI青海大学硕士学位论文AbstractAbstractAsoneofinternationalmajorquarant