靶向vegf的sirna协同5-fu抑制人乳腺癌细胞的实验研究

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1、靶向VEGF的siRNA协同5-FU抑制人乳腺癌细胞的实验研究摘要目的探讨慢病毒介导靶向VEGF小干扰RNA(smallinterferingRNA，siRNA)对人乳腺癌细胞MCF一7增殖、凋亡和凋亡通路中基因表达的影响，以及联合应用抗癌药5一氟尿嘧啶的协同作用。方法以携带VEGFsiRNA序列的慢病毒重组载体感染正常的MCF-7细胞，经反复实验优化，确定感染条件；将人乳腺癌细胞MCF-7分为五组：正常对照组不作特殊处理，阴性对照组感染NC—Lv阴性病毒，慢病毒RNA干扰组感染VEGF-RNAi-Lv慢病毒，5一FU组用5一FU处理MCF一7细胞，慢病毒VEGF—RNAi-Lv+5-FU组

2、用5-FU处理VEGF—RNAi—Lv慢病毒感染的MCF一7细胞；提取细胞的总RNA和蛋白，利用RT-PCR法检测VEGF、p21及bcl一2mRNA的表达，Westernblot检测VEGF、SIRTI、p53、p21、bcl一2、survivin蛋白的表达；利用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(CCK-8)和流式细胞术检测RNAi及协同5一FU对细胞增殖及凋亡的影响。结果慢病毒对MCF一7细胞的感染率达90％以上；与正常对照组相比，RT-PCR检测显示慢病毒VEGF—RNAi—Lv干扰组细胞VEGF、bcl-2的mRNA表达水平明显下调(P(O．05)，p21mRNA表达水平明显上调(P(O

3、．05)，Westernblot显示慢病毒VEGF—siRNA—Lv干扰组细胞VEGF、SIRTI、bcl一2、survivin的蛋白表达水平明显下调(尺0．05)，p53、p21蛋白表达水平明显上调(尺0．05)，而阴性对照组均无明显变化(乃O．05)；与正常对照组及阴性对照组相比，CCK-8及流式细胞术检测显示慢病毒VEGF—RNAi—Lv干扰组、5一FU组及慢病毒VEGF—RNAi-Lv+5-FU组的细胞生长缓慢，增殖明显受到抑制，细胞的增殖抑制率及凋亡率显著提高(尺O．05)，联合治疗组的协同作用更为明显(P(O．05)。结论慢病毒介导的RNAi能明显抑制人乳腺癌细胞VEGF基因的表

4、达，通过下调SIRTI蛋白的表达，导致p53蛋白表达上调，并调控其下游p21、bcl-2、survivin基因的表达，从而诱导细胞的凋亡，并且提高了MCF一7对5一FU的敏感性。硕士研究生王学祥(病原生物学)指导教师于红教授关键词：血管内皮生长因子；RNA干扰；乳腺癌细；5一FU；细胞凋亡ABSTRACTObjective：Toinvestigatetheeffectsoflentivirus-mediatedsmallinterferingRNA(siRNA)targetingVEGFontheproliferation，apoptosisandgeneticexpressioninthe

5、apoptoticpathwayinhumanbreastcancercelllineMCF-7，andtoexplorethesynergisticeffectofRNAinterferenceand5一FUonMCF一7．Methods：LentiviralrecombinantvectorscarryingVEGFsiRNAsequencewasinfectedwithMCF-7cell，andtheinfectionconditionswereoptimizedbytrialsanderrors．HumanbreastcancerMCF一7cellsCanbedividedintof

6、ivegroups：normalcontrolgroup谢tllnospecialtreatment，lentivirusNC—LvnegativecontrolgroupinfectedbyNC-Lvnegativelentivirus，lentivirusVEGF-RNAi—LvinterferencegroupinfectedbyVEGF—RNAi—Lvlentivirus，5一FUgrouptreatedby5-FU，VEGF-RNAi—Lvinterferencecombinedwith5-FUgroupinfectedbyVEGF-RNAi-Lvlentivirusandtrea

7、tedby5一FU．ThetotalRNAandproteinwereextractedandthemRNAexpressionofVEGEp21，bcl-2weredetectedbyRT-RCR，andtheproteinexpressionofVEGF，SIRTl，p53，p21，bcl一2andsurvivinweredetectedbyWesternblot；TheinfluenceofRNAian